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公開番号2025063029
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-04-15
出願番号2024216112,2021573421
出願日2024-12-11,2020-06-13
発明の名称がんの治療ための新規インターロイキン-2バリアント
出願人キュージーンインコーポレイテッド,CUGENE INC.
代理人弁理士法人北青山インターナショナル
主分類C07K 14/55 20060101AFI20250408BHJP(有機化学)
要約【課題】単離されたインターロイキン-2バリアントポリペプチドを提供する。
【解決手段】単離されたインターロイキン-2(IL-2)バリアントポリペプチドであって、特定のアミノ酸配列の位置R38、T41、F42、F44、E62、P65、E68、Y107、またはS125の1つまたは複数が別のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含むIL-2バリアントポリペプチドであり、前記特定のアミノ酸配列で表されるポリペプチドと比較して、IL-2Rαに結合できず、もはやTreg細胞を優先的に活性化しないが、IL-2Rβγ複合体に結合して活性化する能力を保持する、IL-2バリアントポリペプチドが提供される。
【選択図】図18
特許請求の範囲【請求項１】
単離されたインターロイキン－２（ＩＬ－２）バリアントポリペプチドであって、アミノ酸残基の位置Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｙ１０７、またはＳ１２５の１つまたは複数が別のアミノ酸で置換された配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２バリアントポリペプチドであり、配列番号３で表されるポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに結合できず、もはやＴｒｅｇ細胞を優先的に活性化しないが、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に結合して活性化する能力を保持する、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
続きを表示（約 1,700 文字）【請求項２】
単離されたＩＬ－２バリアントポリペプチドであって、アミノ酸残基の位置Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｙ１０７、またはＳ１２５の１つまたは複数が別のアミノ酸で置換された配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２バリアントポリペプチドであり、配列番号３で表されるポリペプチドと比較して、より低いＴｒｅｇ活性を伴うＩＬ－２Ｒαへの結合の減少を示すが、ＩＬ－２Ｒβγ複合体への結合および活性化の能力を保持する、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項３】
単離されたＩＬ－２バリアントポリペプチドであって、アミノ酸残基の位置Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｙ１０７、またはＳ１２５の１つまたは複数が別のアミノ酸で置換された配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２バリアントポリペプチドであり、配列番号３で表されるポリペプチドと比較して、Ｔｒｅｇ活性の増加を伴うＩＬ－２Ｒαへの結合の増強を示す、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項４】
単離されたＩＬ－２バリアントポリペプチドであって、アミノ酸残基の位置Ｌ１９、Ｄ２０、Ｓ１２５またはＱ１２６の１つまたは複数が別のアミノ酸で置換された配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２バリアントポリペプチドであり、配列番号３で表されるポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒβγ複合体を活性化する能力の低下を示す、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項５】
単離されたＩＬ－２バリアントポリペプチドであって、１つのアミノ酸残基の位置Ｓ１２５が別のアミノ酸で置換された配列番号３のアミノ酸配列を含み、配列番号３で表されるポリペプチドと比較して、タンパク質の発現および純度の向上を示す、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項６】
前記アミノ酸置換が、配列番号３の１９位におけるＬ１９Ｄ、Ｌ１９Ｈ、Ｌ１９Ｎ、Ｌ１９Ｐ、Ｌ１９Ｑ、Ｌ１９Ｒ、Ｌ１９Ｓ、Ｌ１９Ｙの置換、３８位におけるＲ３８Ａ、Ｒ３８Ｆ、Ｒ３８Ｇの置換、４１位におけるＴ４１Ａ、Ｔ４１Ｇ、およびＴ４１Ｖの置換、４２位におけるＦ４２Ａの置換、４４位におけるＦ４４ＧおよびＦ４４Ｖの置換、６２位におけるＥ６２Ａ、Ｅ６２Ｆ、Ｅ６２Ｈ、およびＥ６２Ｌの置換、６５位におけるＰ６５Ａ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒの置換、６８位におけるＥ６８Ｅ、Ｅ６８Ｆ、Ｅ６８Ｈ、Ｅ６８Ｌ、およびＥ６８Ｐの置換、１０７位におけるＹ１０７Ｇ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７ＬおよびＹ１０７Ｖの置換、ならびに１２５位におけるＳ１２５Ｉの置換、１２６位におけるＱ１２６Ｅの置換、ならびにＮ末端における５、６、７、８、９、１０もしくは１１個のアミノ酸の欠失変異体またはこれらの置換もしくは欠失変異体の任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項７】
配列番号３のアミノ酸残基の位置Ｐ６５およびＳ１２５における２つのアミノ酸置換を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項８】
配列番号３のアミノ酸残基の位置Ｌ１９、Ｐ６５およびＳ１２５における３つのアミノ酸置換を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項９】
配列番号３１～６６および配列番号１１１～１２０に記載のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号３と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたＩＬ－２バリアントポリペプチドであって、配列番号３で表されるポリペプチドと比較して、もはやＴｒｅｇ細胞を優先的に活性化しないが、ＩＬ－２受容体複合体を活性化する能力を保持する、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【背景技術】
【０００１】
本出願は、２０１９年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／９４７，８０６号および２０１９年６月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／８６１，６５１号の利益を主張するものであり、該仮特許出願はそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される。
続きを表示（約 4,100 文字）【０００２】
インターロイキン２（ＩＬ－２）はＴ細胞に関連して記述がなされた最初の増殖因子である。その発見以後、ＩＬ－２は、インビトロにおいてはＴ細胞の増殖および生存を促進することが示され（Ｓｍｉｔｈ、ＫＡ．（１９８８年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ．、２４０巻、頁１１６９－７６）、Ｔ細胞とウイルス感染（Ｔｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）（Ｂｌａｔｔｍａｎ、ＪＮら（２００３年）、ＮａｔＭｅｄ、９巻、頁５４０－７）やワクチン（Ｆｉｓｈｍａｎ、Ｍ．ら（２００８年）、ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３１巻、頁７２－８０、Ｋｕｄｏ－Ｓａｉｔｏ、Ｃ．ら（２００７年）、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、５６巻、頁１８９７－９１０；Ｌｉｎ、ＣＴ．ら（２００７年）、ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ．、１１４巻、頁８６－９３）との関連においては免疫応答をブーストする能力が示されている。
【０００３】
ＩＬ－２はがん治療で用いられている。組換えヒトＩＬ－２は転移性黒色腫および腎がんに対する効果の高い免疫療法であり、およそ１０％の患者で持続的な反応が見られる。しかし、半減期が短く、毒性が強いことで、ＩＬ－２の最適用量は制限を受けている。さらに、ＩＬ－２は、そのヘテロ三量体型受容体のＩＬ－２Ｒαβγに対して、より大きな親和性で結合するため、高レベルのＩＬ－２Ｒαを恒常的に発現している免疫抑制的な制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の優先的な増殖が起こる。Ｔｒｅｇの増殖はがん免疫療法にとってのＩＬ－２の望ましくない効果となる。その結果、ＩＬ－２を使用したがんの免疫療法の成功には、１）どうように副作用を抑えつつ、必要な場所で活性化させるか、および２）どのようにＴｒｅｇの刺激を抑える一方で、エフェクターＴ細胞を優先的に活性化させるかという２つの基本的な重要課題に取り組まなければならない。
【０００４】
さらに最近になって、細胞傷害性のエフェクターＴ細胞を選択的に刺激するようにＩＬ－２を改変できることが分かった。様々なアプローチから、改善された選択的な免疫刺激能を有するＩＬ－２バリアントが生成されるに至った。これらのＩＬ－２バリアントのなかには、主に高親和性の受容体（α鎖、β鎖、およびγ鎖）によりシグナル伝達する能力を増強し、中間親和性の受容体（β鎖およびγ鎖）によりシグナル伝達する能力は増強しないように設計されたものもある。基本的な考え方としては、確認された毒性作用の原因であると考えられたＮＫ細胞におけるシグナル伝達は促進せずに、Ｔ細胞におけるシグナル伝達を促進することとした。この分野の発明としては以下のものがある：米国特許第７，１８６，８０４号、米国特許第７，１０５，６５３号、米国特許第６，９５５，８０７号、米国特許第５，２２９，１０９号、米国特許出願公開第２００５０１４２１０６号。これらの発明はいずれも、生体内で天然のＩＬ－２よりも高い治療有効性を有するＩＬ－２のバリアントに関するものではないことに留意することが重要である。
【０００５】
要約すると、ＩＬ－２は、様々な細胞集団の生物活性に非常に関りがある、高度に多面的なサイトカインである。この特性は、ＩＬ－２を、免疫応答の制御における重要な交点とし、各治療法および複雑な免疫調節の魅力的な標的としている。さらに、受容体サブユニットに偏ったＩＬ－２バリアントを、ＩＬ－２によって媒介される選択的免疫調節を達成するように作製して、がん細胞を攻撃するＴｅｆｆ細胞を優先的に増殖および活性化し、一方ではＴｒｅｇ細胞の増殖および活性化を減少させることができる。
【発明の概要】
【０００６】
１つの態様において、本発明は、ＩＬ－２Ｒαへの結合能力が減少または消失したＩＬ－２活性の選択的アゴニストであることを特徴とするＩＬ－２の変異バリアントの作製に関する。具体的には、これらのバリアントは、生体内でネイティブな制御性Ｔ細胞を増殖させる証明済みの能力に由来するネイティブなＩＬ－２による治で観察される制限を克服する方法をもたらすことになる。本発明は、変異している数個のアミノ酸を除いて、ヒトＩＬ－２とその一次配列を共有するポリペプチドに関する。導入された変異は、これらのポリペプチドのＴｒｅｇ細胞を刺激する能力を実質的に低下させ、ＩＬ－２により高い有効性を与える。さらに、導入された変異は、ＣＤ２５によって媒介されるＶＬＳおよびＣＤ２５によって媒介されるシンク効果を減少させると予想される。本発明は、変異している１～数個のアミノ酸を除いて、ヒトＩＬ－２とその一次配列を共有するポリペプチドに関する。本発明はまた、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性が望ましくないがんまたは感染症などの疾患の治療のために、単独で、またはワクチン、もしくは免疫チェックポイント阻害剤、もしくは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）標的生物製剤と組み合わせて、または二機能性分子構築物の一部として、これらの変異バリアントを治療に使用することを含む。
【０００７】
１つの態様において、本発明は、ＩＬ－２Ｒαへの結合能力の減少または消失にくわえて、ＩＬ－２Ｒβγ相互作用を減少させることによって全体的な効力を最適に調節したＩＬ－２活性の選択的アゴニストであることを特徴とするＩＬ－２の変異バリアントの作製に関する。導入された変異は、経路の過剰活性化を防ぎ、望ましくない「オンターゲット」であるが「標的組織外に対する」毒性を低減し、潜在的なシンクを減少させ、リンパ球の過剰刺激に伴う活性化誘導細胞疲弊を下げ、受容体媒介のＩＬ－２インターナリゼーションを軽減し、したがって、生体内での半減期を延長し、ゆっくりと持続する薬力学をもたらして、生体内分布、生体利用能、機能および抗腫瘍有効性を向上させる。また、本発明の発明者らは、ＩＬ－２Ｒαへの結合が減少／消失し、ＩＬ－２Ｒβγ活性が減弱したＩＬ－２バリアントの使用が、サイトカインと、著しく異なる効力および分子量を呈する抗体アームとの間の化学両論的バランスの確立を容易にして、最適な投薬およびを可能にし、各アームの機能を維持することを提案する。本発明は、変異している１～数個のアミノ酸を除いて、ヒトＩＬ－２とその一次配列を共有するポリペプチドに関する。本発明はまた、がんまたは感染症などの疾患の治療のために、単独で、またはワクチン、もしくは免疫チェックポイント阻害剤、もしくは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）標的生物製剤と組み合わせて、または二機能性分子構築物の一部として、これらの変異バリアントを治療に使用することを含む。
【０００８】
１つの態様において、本発明は、ＩＬ－２Ｒαへの結合能力の減少または消失にくわえて、ＩＬ－２Ｒβγ相互作用が減少したＩＬ－２活性の選択的アゴニストであることを特徴とするＩＬ－２の変異バリアントの作製に関する。導入された変異は、延長され、耐久性のある薬力学および潜在的に薬物動態をもたらす。さらに、導入された変異は、細胞疲弊および活性化によって誘導される細胞死を減少させ、耐久性のあるリンパ球応答性を増強する。結果として、導入された変異は、より少ない頻度の投与レジメンが可能にし、診療所での投与の利便性を提供する。また、物品コストの削減も予想される。本発明は、変異している１～数個のアミノ酸を除いて、ヒトＩＬ－２とその一次配列を共有するポリペプチドに関する。本発明はまた、がんまたは感染症などの疾患の治療のために、単独で、またはワクチン、もしくは免疫チェックポイント阻害剤、もしくは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）標的生物製剤と組み合わせて、または二機能性分子構築物の一部として、これらの変異バリアントを治療に使用することを含む。
【０００９】
１つの態様において、本発明は、ＩＬ－２Ｒαへの結合が消失し、野生型対応物とは比較にならない予想外の大きい程度でエフェクターＴおよびＮＫ細胞応答が強化されたＩＬ－２活性の選択的アゴニストであることを特徴とするＩＬ－２の変異バリアントの作製に関する。ＣＤ２５結合を消失させる変異は、ＣＤ２５またはＣＤ２５＋細胞へのシンクを減少させ、結果としてＩＬ－２Ｒβγへの利用可能性を増加させると予想される。受容体占有が高まることにより、活発な細胞傷害性細胞応答および強い腫瘍殺傷有効性が引き出される。本発明は、変異している１～数個のアミノ酸を除いて、ヒトＩＬ－２とその一次配列を共有するポリペプチドに関する。本発明はまた、がんまたは感染症などの疾患の治療のために、単独で、またはワクチン、もしくは免疫チェックポイント阻害剤、もしくは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）標的生物製剤と組み合わせて、または二機能性分子構築物の一部として、これらの変異バリアントを治療に使用することを含む。
【００１０】
本発明の１つの態様において、導入された変異は、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）への結合能力は低下させたが、低レベルのＴｒｅｇ応答を保持した。残存する免疫制御性Ｔｒｅｇは、免疫カウンターバランスを可能にし、全身的な忍容性を向上させ、細胞毒性エフェクター細胞に対して過剰に傾斜しない免疫バランスを確保する。微調整されたＴｒｅｇ応答は、腫瘍殺傷有効性を損なわない状態にあるが、末梢性寛容を維持するのに十分な強さである。本発明は、変異している１～数個のアミノ酸を除いて、ヒトＩＬ－２とその一次配列を共有するポリペプチドに関する。本発明はまた、がんまたは感染症などの疾患の治療のために、単独で、またはワクチン、もしくは免疫チェックポイント阻害剤、もしくは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）標的生物製剤と組み合わせて、または二機能性分子構築物の一部として、これらの変異バリアントを治療に使用することを含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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