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公開番号2025071138
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-02
出願番号2025023522,2021535122
出願日2025-02-17,2019-12-20
発明の名称ナノトランスポゾン組成物および使用方法
出願人ポセイダセラピューティクス,インコーポレイティド
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/11 20060101AFI20250424BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】遺伝子治療のために細胞を修飾する方法として、特にヒト細胞で用いるために、トランスポゾン配列を保持するベクターに、非天然起源の構造的な改良を含むナノトランスポゾン組成物、これらの組成物の作製方法および使用方法を提供する。
【解決手段】以下:第1の核酸配列、これは、(a)第1の逆位末端反復配列(ITR)、(b)第2のITR、および(c)ITR内配列を含み、前記ITR内配列は、トランスポゾン配列を含む;ならびにITR間配列を含む第2の核酸配列、を含む組成物を開示し、前記ITR間配列の長さは、両端部を含めて1～600ヌクレオチドである。好ましくは、前記組成物はナノトランスポゾンである。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
以下：
第１の核酸配列、これは、（ａ）第１の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）、（ｂ）第２のＩＴＲ、および（ｃ）ＩＴＲ間配列を含み、前記ＩＴＲ間配列は、トランスポゾン配列を含む；ならびに
ＩＴＲ間配列を含む第２の核酸配列、ここで、前記ＩＴＲ間配列の長さは１～６００ヌクレオチドである、
を有する１つのポリヌクレオチドを含む組成物。
続きを表示（約 660 文字）【請求項２】
前記ＩＴＲ間配列の長さが１～１００ヌクレオチドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第１の核酸配列、又は前記第２の核酸配列は、複製起点配列をさらに含む、請求項１又は２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
前記複製起点配列の長さは、１～４５０ヌクレオチドである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記複製起点配列は、Ｒ６Ｋ複製起点を含む、請求項３又は４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記第１の核酸、又は前記第２の核酸配列は、第１の選択マーカーをコードする配列をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記第１の選択マーカーの長さは、１～２００ヌクレオチドである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
任意で前記第１の選択マーカーは、スクロース選択マーカーである、請求項６又は７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記スクロース選択マーカーは、ＲＮＡ－ＯＵＴ選択マーカーである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記第１の核酸配列、又は前記第２の核酸配列は、組換え部位、切除部位、連結部位、またはそれらの組合せを含まない、又は前記第１の核酸配列又は前記第２の核酸配列は、外来ＤＮＡをコードする配列を含まない、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、２０１８年１２月２０日付けの米国特許出願第62/783,133号、２０１９年３月７日付けの米国特許出願第62/815,335号、および２０１９年３月８日付けの米国特許出願第62/815,845号の優先権および利益を主張する。これらの出願のそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 1,700 文字）【０００２】
配列リストの参照による組込み
２０１９年１２月１９日に作成され、サイズが295 MBである「POTH-047_001WO Seq Listing_ST25.txt」と題するファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本開示の分野
本開示は、分子生物学に関し、より具体的には、ナノトランスポゾン、ナノトランスポゾンを含む細胞組成物、その製造方法および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
遺伝子治療で用いられる改良された遺伝子転移の組成物および方法に関して、当技術分野で長期に亘って求められてきたがまだ達成できていない要求がある。本開示は、遺伝子治療のために細胞を修飾する方法として、特にヒト細胞で用いるために、トランスポゾン配列を保持するベクターに、非天然起源の構造的な改良を含むナノトランスポゾン組成物、これらの組成物の作製方法および使用方法を提供する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の概要
本開示は、以下：第１の核酸配列、これは、（ａ）第１の逆位末端反復配列（ITR）、（ｂ）第２のITR、および（ｃ）ITR内配列を含み、前記ITR内配列は、トランスポゾン配列を含む；ならびに、両端部を含んで1～600ヌクレオチドの長さを有するITR間配列を含む第２の核酸配列、を含む組成物を提供する。好ましい態様では、ITR間配列の長さは、両端部を含んで1～100ヌクレオチドである。この組成物は、トランスポゾンであってもよく、あるいはナノトランスポゾンであってもよい。好ましい態様では、トランスポゾンは、piggyBacトランスポゾンである。
【０００６】
第１の核酸配列および／または第２の核酸配列は、さらに複製起点配列を含んでもよい。複製起点配列の長さは、1～450ヌクレオチドであってもよい。複製起点配列は、R6K複製起点を含んでもよい。
【０００７】
第１の核酸配列および／または第２の核酸配列は、さらに第１の選択マーカーをコードする配列を含んでもよい。第１の選択マーカーの長さは、1～200ヌクレオチドであってもよい。第１の選択マーカーは、スクロース選択マーカーであってもよい。好ましい態様では、スクロース選択マーカーは、RNA-OUT選択マーカーである。
【０００８】
第１の核酸配列および／または第２の核酸配列は、組換え部位、切除部位、連結部位、またはそれらの組合せを含んでいなくてもよい。第１の核酸配列および／または第２の核酸配列は、外来DNAをコードする配列を含んでいなくてもよい。
【０００９】
第１の核酸配列は、少なくとも１つの外因性配列と、哺乳動物細胞内で外因性配列を発現できるプロモーターをコードする配列とをさらに含んでもよい。第１の核酸配列は、さらにインスレーターをコードする少なくとも１つの配列を含んでもよい。第１の核酸配列は、さらにポリアデノシン（polyA）配列を含んでもよい。哺乳動物細胞内で外因性配列を発現できるプロモーターをコードする配列は、ヒト細胞内で外因性配列を発現できる。プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであってもよい。
【００１０】
少なくとも１つの外因性配列は、非天然起源の抗原受容体をコードする配列、治療用ポリペプチドをコードする配列、またはそれらの組合せを含んでもよい。好ましい態様では、非天然起源の抗原受容体は、キメラ抗原受容体（CAR）を含む。このCARは、（ａ）抗原認識領域を含む外部ドメイン（ectodomain）、（ｂ）膜貫通ドメイン、および（ｃ）少なくとも１つの共刺激ドメインを含む内部ドメイン（endodomain）を含んでもよい。抗原認識領域は、少なくとも１つの単鎖可変断片（scFv）、単一ドメイン抗体、センチリン（Centyrin）、またはそれらの組合せを含んでもよい。単一ドメイン抗体は、VHHまたはVHであってもよい。
（【００１１】以降は省略されています）

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