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公開番号2025072522
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-09
出願番号2025017731,2021569894
出願日2025-02-05,2020-05-22
発明の名称環状RNA組成物及び方法
出願人マサチューセッツインスティテュートオブテクノロジー,オルナセラピューティクスインコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類A61K 48/00 20060101AFI20250430BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】環状RNAポリヌクレオチドをヒト免疫細胞に送達することができる医薬組成物を提供する。
【解決手段】a.3’グループIイントロンフラグメントと、内部リボソーム侵入部位(IRES)と、キメラ抗原受容体(CAR)またはT細胞受容体(TCR)複合体タンパク質をコードする発現配列と、5’グループIイントロンフラグメントとを含む、環状RNAポリヌクレオチド、b.(i)イオン化可能脂質、(ii)構造脂質、及び(iii)PEG修飾脂質のうちの少なくとも1つを含む、輸送ビヒクルを含む、医薬組成物であって、輸送ビヒクルが、環状RNAポリヌクレオチドを、ヒト対象に存在するヒト免疫細胞に送達することができ、その結果、CARがヒト免疫細胞において翻訳され、ヒト免疫細胞の表面上で発現される、前記医薬組成物である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ａ．以下の順序で、３’グループＩイントロンフラグメントと、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体タンパク質をコードする発現配列と、５’グループＩイントロンフラグメントとを含む、環状ＲＮＡポリヌクレオチド、ならびに
ｂ．（ｉ）イオン化可能脂質、（ｉｉ）構造脂質、及び（ｉｉｉ）ＰＥＧ修飾脂質のうちの少なくとも１つを含む、輸送ビヒクル
を含む、医薬組成物であって、
前記輸送ビヒクルが、前記環状ＲＮＡポリヌクレオチドを、ヒト対象に存在するヒト免疫細胞に送達することができ、その結果、前記ＣＡＲが前記ヒト免疫細胞において翻訳され、前記ヒト免疫細胞の表面上で発現される、前記医薬組成物。
続きを表示（約 2,300 文字）【請求項２】
その必要がある前記ヒト対象への静脈内投与用に製剤化された、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記３’グループＩイントロンフラグメント及び５’グループＩイントロンフラグメントが、アナベナグループＩイントロンフラグメントである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記３’イントロンフラグメント及び５’イントロンフラグメントが、インタクトなイントロン内のＬ９ａ－５順列置換部位によって定義される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記３’イントロンフラグメント及び５’イントロンフラグメントが、インタクトなイントロン内のＬ８－２順列置換部位によって定義される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＩＲＥＳが、タウラ症候群ウイルス、トリアトーマウイルス、タイラー脳脊髄炎ウイルス、シミアンウイルス４０、ヒアリ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓｉｎｖｉｃｔａ）ウイルス１、ムギクビレアブラムシ（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ）ウイルス、細網内皮症ウイルス、ヒトポリオウイルス１、チャバネアオカメムシ（Ｐｌａｕｔｉａｓｔａｌｉ）腸ウイルス、カシミールハチウイルス、ヒトライノウイルス２、ホマロディスカ・コアギュラタ（Ｈｏｍａｌｏｄｉｓｃａｃｏａｇｕｌａｔａ）ウイルス－１、ヒト免疫不全ウイルス１型、ホマロディスカ・コアギュラタウイルス－１、ヒメトビＰウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ＧＢ型肝炎ウイルス、口蹄疫ウイルス、ヒトエンテロウイルス７１、ウマ鼻炎ウイルス、ウスジロエダシャク（Ｅｃｔｒｏｐｉｓｏｂｌｉｑｕａ）ピコルナ様ウイルス、脳心筋炎ウイルス、ショウジョウバエＣウイルス、ヒトコクサッキーウイルスＢ３、アブラナ科トバモウイルス、クリケット麻痺ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス１、ブラッククイーンセルウイルス、アブラムシ致死麻痺ウイルス、トリ脳脊髄炎ウイルス、急性ミツバチ麻痺ウイルス、ハイビスカスクロロティックリングスポットウイルス、古典的ブタ熱ウイルス、ヒトＦＧＦ２、ヒトＳＦＴＰＡ１、ヒトＡＭＬ１／ＲＵＮＸ１、ショウジョウバエアンテナペディア、ヒトＡＱＰ４、ヒトＡＴ１Ｒ、ヒトＢＡＧ－１、ヒトＢＣＬ２、ヒトＢｉＰ、ヒトｃ－ＩＡＰ１、ヒトｃ－ｍｙｃ、ヒトｅＩＦ４Ｇ、マウスＮＤＳＴ４Ｌ、ヒトＬＥＦ１、マウスＨＩＦ１アルファ、ヒトｎ．ｍｙｃ、マウスＧｔｘ、ヒトｐ２７ｋｉｐｌ、ヒトＰＤＧＦ２／ｃ－ｓｉｓ、ヒトｐ５３、ヒトＰｉｍ－１、マウスＲｂｍ３、ショウジョウバエｒｅａｐｅｒ、イヌＳｃａｍｐｅｒ、ショウジョウバエＵｂｘ、ヒトＵＮＲ、マウスＵｔｒＡ、ヒトＶＥＧＦ－Ａ、ヒトＸＩＡＰ、ショウジョウバエｈａｉｒｌｅｓｓ、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＴＦＩＩＤ、Ｓ．セレビシエＹＡＰ１、タバコエッチウイルス、カブクリンクルウイルス、ＥＭＣＶ－Ａ、ＥＭＣＶ－Ｂ、ＥＭＣＶ－Ｂｆ、ＥＭＣＶ－Ｃｆ、ＥＭＣＶｐＥＣ９、ピコビルナウイルス、ＨＣＶＱＣ６４、ヒトコサウイルスＥ／Ｄ、ヒトコサウイルスＦ、ヒトコサウイルスＪＭＹ、ライノウイルスＮＡＴ００１、ＨＲＶ１４、ＨＲＶ８９、ＨＲＶＣ－０２、ＨＲＶ－Ａ２１、サリウイルスＡＳＨ１、サリウイルスＦＨＢ、サリウイルスＮＧ－Ｊ１、ヒトパレコウイルス１、クロヒウイルスＢ、Ｙｃ－３、ロサウイルスＭ－７、シャンバウイルスＡ、パシウイルスＡ、パシウイルスＡ２、エコーウイルスＥ１４、ヒトパレコウイルス５、アイチウイルス、Ａ型肝炎ウイルスＨＡ１６、フォピウイルス、ＣＶＡ１０、エンテロウイルスＣ、エンテロウイルスＤ、エンテロウイルスＪ、ヒトペギウイルス２、ＧＢＶ－ＣＧＴ１１０、ＧＢＶ－ＣＫ１７３７、ＧＢＶ－ＣＩｏｗａ、ペギウイルスＡ１２２０、パシウイルスＡ３、サペロウイルス、ロサウイルスＢ、バクンサ（Ｂａｋｕｎｓａ）ウイルス、トレモウイルスＡ、ブタパシウイルス１、ＰＬＶ－ＣＨＮ、パシウイルスＡ、シシニウイルス、ヘパシウイルスＫ、ヘパシウイルスＡ、ＢＶＤＶ１、ボーダー病ウイルス、ＢＶＤＶ２、ＣＳＦＶ－ＰＫ１５Ｃ、ＳＦ５７３ジシストロウイルス、湖北ピコルナ様ウイルス、ＣＲＰＶ、サリウイルスＡＢＮ５、サリウイルスＡＢＮ２、サリウイルスＡ０２３９４、サリウイルスＡＧＵＴ、サリウイルスＡＣＨ、サリウイルスＡＳＺ１、サリウイルスＦＨＢ、ＣＶＢ３、ＣＶＢ１、エコーウイルス７、ＣＶＢ５、ＥＶＡ７１、ＣＶＡ３、ＣＶＡ１２、ＥＶ２４、またはｅＩＦ４Ｇに対するアプタマーに由来する、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ＩＲＥＳが、ＣＶＢ３ＩＲＥＳまたはそのフラグメントもしくは変異体を含む、あるいは前記ＩＲＥＳが、配列番号６５に従う配列を含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ＩＲＥＳが、サリウイルスＳＺ１ＩＲＥＳまたはそのフラグメントもしくは変異体を含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ＩＲＥＳが、配列番号６３に従う配列を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
第１の内部スペーサーを、前記３’グループＩイントロンフラグメントと前記ＩＲＥＳとの間に、及び
第２の内部スペーサーを、前記発現配列と前記５’グループＩイントロンフラグメントとの間に
含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、２０１９年５月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／８５１，５４８号；２０１９年６月４日に出願された米国仮特許出願第６２／８５７，１２１号；２０１９年６月５日に出願された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３５５３１、２０１９年１２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／９４３，７９６号；２０１９年１２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／９４３，７７９号；及び２０２０年２月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／９７２，１９４号（これらの開示は全ての目的に関して参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の利益及びこれらに対する優先権を主張する。
続きを表示（約 4,000 文字）【背景技術】
【０００２】
背景
従来の遺伝子療法は、宿主細胞に所望の遺伝子情報を挿入するためのＤＮＡの使用を伴う。細胞へと導入されたＤＮＡは通常、１つまたは複数のトランスフェクトされた細胞のゲノムへとある程度組み込まれ、宿主内での導入された遺伝物質の長期的な作用を可能にする。かかる持続的な作用には実質的な利点があり得る一方で、外因性ＤＮＡの宿主ゲノムへの組み込みは、多くの有害な作用も有し得る。例えば、導入されたＤＮＡがインタクトな遺伝子へと挿入され、内因性遺伝子の機能を妨げるまたさらには完全に排除する突然変異をもたらすことになる可能性がある。ゆえに、ＤＮＡを用いた遺伝子療法は、処置される宿主において、致命的な遺伝子機能の障害、例えば、必須酵素の産生の排除もしくは有害な低下、または細胞成長の制御に決定的に重要な遺伝子の妨害をもたらす可能性があり、非制御または癌性細胞増殖をもたらし得る。加えて、従来のＤＮＡベースの遺伝子療法では、所望の遺伝子産物の効果的な発現のためには強力なプロモーター配列を含める必要があり、これもまた、細胞内の正常な遺伝子発現の制御において望ましくない変化をもたらし得る。また、ＤＮＡベースの遺伝物質が望ましくない抗ＤＮＡ抗体の誘導をもたらし、それが致命的となり得る免疫応答を誘発し得る可能性もある。ウイルスベクターを使用する遺伝子療法アプローチも、有害な免疫応答をもたらし得る。一部の状況では、ウイルスベクターが宿主ゲノムに組み込まれることさえある。加えて、臨床グレードのウイルスベクターの産生は、費用も時間もかかる。ウイルスベクターを使用した導入遺伝物質の標的化送達も、制御が難しくあり得る。ゆえに、ＤＮＡベースの遺伝子療法は、ウイルスベクターを使用する分泌タンパク質の送達に関して評価されてきたが（米国特許第６，０６６，６２６号；ＵＳ２００４／０１１０７０９）、これらのアプローチは、これらのさまざまな理由で制限され得る。
【０００３】
ＤＮＡとは対照的に、遺伝子療法剤としてのＲＮＡの使用は、ＲＮＡがトランスフェクトされた細胞のゲノムへと安定して組み込まれることのリスクを伴わないため、実質的により安全であり、ゆえに導入遺伝物質が必須遺伝子の正常な機能を妨害する、または有害もしくは発癌効果をもたらす突然変異を引き起こす懸念を排除し、外来プロモーター配列は、コードされたタンパク質の効果的な翻訳のために必要とされず、再度、起こり得る有害な副作用を回避する。加えて、ｍＲＮＡは、その機能を実行するために核に入る必要がないが、ＤＮＡはこの大きな障壁を克服しなければならない。
【０００４】
環状ＲＮＡは、安定した形態のＲＮＡの設計及び産生に役立つ。ＲＮＡ分子の環状化は、特に、不活性なコンフォメーションで折り畳まれやすい分子の場合、ＲＮＡ構造及び機能の研究に利点を提供する（ＷａｎｇａｎｄＲｕｆｆｎｅｒ，１９９８）。環状ＲＮＡはまた、特に、タンパク質置換療法及びワクチン接種を含む、遺伝子発現及び治療剤のＲＮＡベースの制御の研究分野において、特に興味深く、インビボ用途に有用であり得る。
【０００５】
がん細胞上の抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子修飾されたＴ細胞の使用は、がんの処置のための魅力的な治療戦略である。ただし、ＣＡＲ及びＴＣＲを発現するようにＴ細胞を修飾する現在の方法、及び結果得られる治療は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び他の合併症の形態で毒性を伴う。ＣＡＲ及び組換えＴＣＲを発現するように細胞を操作するより安全な方法が依然として必要とされている。
【０００６】
本発明の前に、インビトロで環状化ＲＮＡを作製するための３つの主要な技術があった：スプリントを介した方法、順列置換イントロン－エクソン法、及びＲＮＡリガーゼを介した方法。ただし、既存の方法論は、環状化できるＲＮＡのサイズによって制限されるため、その治療用途が制限される。
【発明の概要】
【０００７】
概要
一態様では、以下の順序で、３’グループＩイントロンフラグメント、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体タンパク質をコードする発現配列、及び５’グループＩイントロンフラグメントを含む環状ＲＮＡポリヌクレオチド、ならびに（ｉ）イオン化可能脂質、（ｉｉ）構造脂質、及び（ｉｉｉ）ＰＥＧ修飾脂質のうちの少なくとも１つを含む輸送ビヒクルを含む医薬組成物を本明細書に提供し、輸送ビヒクルは、環状ＲＮＡポリヌクレオチドを、ヒト対象に存在するヒト免疫細胞に送達することができ、その結果、ＣＡＲはヒト免疫細胞において翻訳され、ヒト免疫細胞の表面上で発現される。
【０００８】
一部の実施形態では、医薬組成物は、それを必要とするヒト対象への静脈内投与用に製剤化されている。一部の実施形態では、３’グループＩイントロンフラグメント及び５’グループＩイントロンフラグメントは、アナベナグループＩイントロンフラグメントである。
【０００９】
ある特定の実施形態では、３’イントロンフラグメント及び５’イントロンフラグメントは、インタクトなイントロンのＬ９ａ－５順列置換部位によって定義される。ある特定の実施形態では、３’イントロンフラグメント及び５’イントロンフラグメントは、インタクトなイントロンのＬ８－２順列置換部位によって定義される。
【００１０】
一部の実施形態では、ＩＲＥＳは、タウラ症候群ウイルス、トリアトーマウイルス、タイラー脳脊髄炎ウイルス、シミアンウイルス４０、ヒアリ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓｉｎｖｉｃｔａ）ウイルス１、ムギクビレアブラムシ（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ）ウイルス、細網内皮症ウイルス、ヒトポリオウイルス１、チャバネアオカメムシ（Ｐｌａｕｔｉａｓｔａｌｉ）腸ウイルス、カシミールハチウイルス、ヒトライノウイルス２、ホマロディスカ・コアギュラタ（Ｈｏｍａｌｏｄｉｓｃａｃｏａｇｕｌａｔａ）ウイルス－１、ヒト免疫不全ウイルス１型、Ｈｏｍａｌｏｄｉｓｃａｃｏａｇｕｌａｔａウイルス－１、ヒメトビＰウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ＧＢ型肝炎ウイルス、口蹄疫ウイルス、ヒトエンテロウイルス７１、ウマ鼻炎ウイルス、ウスジロエダシャク（Ｅｃｔｒｏｐｉｓｏｂｌｉｑｕａ）ピコルナ様ウイルス、脳心筋炎ウイルス、ショウジョウバエＣウイルス、ヒトコクサッキーウイルスＢ３、アブラナ科トバモウイルス、クリケット麻痺ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス１、ブラッククイーンセルウイルス、アブラムシ致死麻痺ウイルス、トリ脳脊髄炎ウイルス、急性ミツバチ麻痺ウイルス、ハイビスカスクロロティックリングスポットウイルス、古典的ブタ熱ウイルス、ヒトＦＧＦ２、ヒトＳＦＴＰＡ１、ヒトＡＭＬ１／ＲＵＮＸ１、ショウジョウバエアンテナペディア、ヒトＡＱＰ４、ヒトＡＴ１Ｒ、ヒトＢＡＧ－１、ヒトＢＣＬ２、ヒトＢｉＰ、ヒトｃ－ＩＡＰ１、ヒトｃ－ｍｙｃ、ヒトｅＩＦ４Ｇ、マウスＮＤＳＴ４Ｌ、ヒトＬＥＦ１、マウスＨＩＦ１アルファ、ヒトｎ．ｍｙｃ、マウスＧｔｘ、ヒトｐ２７ｋｉｐｌ、ヒトＰＤＧＦ２／ｃ－ｓｉｓ、ヒトｐ５３、ヒトＰｉｍ－１、マウスＲｂｍ３、ショウジョウバエｒｅａｐｅｒ、イヌＳｃａｍｐｅｒ、ショウジョウバエＵｂｘ、ヒトＵＮＲ、マウスＵｔｒＡ、ヒトＶＥＧＦ－Ａ、ヒトＸＩＡＰ、ショウジョウバエｈａｉｒｌｅｓｓ、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＴＦＩＩＤ、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＹＡＰ１、タバコエッチウイルス、カブクリンクルウイルス、ＥＭＣＶ－Ａ、ＥＭＣＶ－Ｂ、ＥＭＣＶ－Ｂｆ、ＥＭＣＶ－Ｃｆ、ＥＭＣＶｐＥＣ９、ピコビルナウイルス、ＨＣＶＱＣ６４、ヒトコサウイルスＥ／Ｄ、ヒトコサウイルスＦ、ヒトコサウイルスＪＭＹ、ライノウイルスＮＡＴ００１、ＨＲＶ１４、ＨＲＶ８９、ＨＲＶＣ－０２、ＨＲＶ－Ａ２１、サリウイルスＡＳＨ１、サリウイルスＦＨＢ、サリウイルスＮＧ－Ｊ１、ヒトパレコウイルス１、クロヒウイルスＢ、Ｙｃ－３、ロサウイルスＭ－７、シャンバウイルスＡ、パシウイルスＡ、パシウイルスＡ２、エコーウイルスＥ１４、ヒトパレコウイルス５、アイチウイルス、Ａ型肝炎ウイルスＨＡ１６、フォピウイルス、ＣＶＡ１０、エンテロウイルスＣ、エンテロウイルスＤ、エンテロウイルスＪ、ヒトペギウイルス２、ＧＢＶ－ＣＧＴ１１０、ＧＢＶ－ＣＫ１７３７、ＧＢＶ－ＣＩｏｗａ、ペギウイルスＡ１２２０、パシウイルスＡ３、サペロウイルス、ロサウイルスＢ、バクンサ（Ｂａｋｕｎｓａ）ウイルス、トレモウイルスＡ、ブタパシウイルス１、ＰＬＶ－ＣＨＮ、パシウイルスＡ、シシニウイルス、ヘパシウイルスＫ、ヘパシウイルスＡ、ＢＶＤＶ１、ボーダー病ウイルス、ＢＶＤＶ２、ＣＳＦＶ－ＰＫ１５Ｃ、ＳＦ５７３ジシストロウイルス、湖北ピコルナ様ウイルス、ＣＲＰＶ、サリウイルスＡＢＮ５、サリウイルスＡＢＮ２、サリウイルスＡ０２３９４、サリウイルスＡＧＵＴ、サリウイルスＡＣＨ、サリウイルスＡＳＺ１、サリウイルスＦＨＢ、ＣＶＢ３、ＣＶＢ１、エコーウイルス７、ＣＶＢ５、ＥＶＡ７１、ＣＶＡ３、ＣＶＡ１２、ＥＶ２４、またはｅＩＦ４Ｇに対するアプタマーに由来する。
（【００１１】以降は省略されています）

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