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公開番号2025072544
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-09
出願番号2025018502,2023544703
出願日2025-02-06,2021-11-10
発明の名称胎盤加水分解物およびその製造方法
出願人グリーン・クロス・ウェルビーイング・コーポレイション,GREEN CROSS WELLBEING CORPORATION,株式会社日本生物製剤
代理人弁理士法人深見特許事務所
主分類C12N 5/071 20100101AFI20250430BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】胎盤加水分解物の製造方法を提供する。
【解決手段】動物胎盤破砕物を脱脂し、乾燥して、動物胎盤破砕物粉末を得るステップと、前記動物胎盤破砕物脱脂粉末にタンパク質分解酵素酸溶液を処理して酵素分解するステップと、前記分解物を陰イオン交換樹脂と接触させてイオン交換するステップとを含むことにより、薬理活性を示すことができるアミノ酸、オリゴペプチドを多量に含む胎盤加水分解物を製造する方法である。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
動物胎盤破砕物を脱脂し、乾燥して、動物胎盤破砕物粉末を得るステップと、
前記動物胎盤破砕物脱脂粉末にタンパク質分解酵素酸溶液を処理して酵素分解するステップと、
前記分解物を陰イオン交換樹脂と接触させてイオン交換するステップとを含む、胎盤加水分解物の製造方法。
続きを表示（約 780 文字）【請求項２】
前記脱脂は、胎盤破砕物にアセトン、アルコールおよびエステルからなる群より選択される有機溶媒を加えて行われる、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項３】
前記脱脂は、前記胎盤破砕物にアセトン、アルコールまたはエステルを含む有機溶媒のいずれか一つを加えて２時間～８時間脱脂させるステップと、６０～１００℃で１０時間～２４時間乾燥して前記有機溶媒を除去するステップとを含んで行われる、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項４】
前記脱脂および有機溶媒の除去は複数回行われ、１回目に比べて２回目でより長時間脱脂する、請求項３に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項５】
前記タンパク質分解酵素は、パパイン（Ｐａｐａｉｎ）、ペプシン（ｐｅｐｓｉｎ）、ブロメライン（Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）、プロナーゼ（Ｐｒｏｎａｓｅ）、またはアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）である、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項６】
前記酸溶液の酸濃度は０．１～１０％である、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項７】
前記酵素分解時、胎盤破砕物脱脂粉末１０ｋｇ～２５ｋｇに対してタンパク質分解酵素０．５ｋｇ～３ｋｇを処理する、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項８】
前記陰イオン交換樹脂との接触は、前記分解物に陰イオン交換樹脂を添加するか、または前記分解物を陰イオン交換樹脂カラムに通過させて行われる、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。
【請求項９】
前記イオン交換された分解物に塩基を添加してｐＨを調整するステップをさらに含む、請求項１に記載の胎盤加水分解物の製造方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、胎盤加水分解物およびその製造方法に関する。
続きを表示（約 2,900 文字）【背景技術】
【０００２】
胎盤（ｐｌａｃｅｎｔａ）は妊娠した哺乳類の子宮内に出来る器官であり、臍帯を通して胎児に栄養分を供給して命を支える。胎盤は出産時に子宮から排出され、胎盤が出ることを後産という。
【０００３】
胎盤には必須アミノ酸、メラトニン、ＲＮＡ、ＤＮＡなどの核酸成分、抗酸化酵素であるＳＯＤ（ＳｕｐｅｒｏｘｉｄｅＤｉｓｍｕｔａｓｅ）、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、抗酸化剤、免疫補助因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）、胎盤ペプチド、インスリン様成長因子（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ－ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）、上皮成長因子（ＥＧＦＳ、ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ）および独特な老化細胞活性因子（ＳＣＡＦＳ、ＳｅｎｅｓｃｅｎｔｃｅｌｌＡｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｓ）などの成長因子とサイトカイン類が含まれており、疲労回復、免疫増強などに有用であることが知られている。
【０００４】
この胎盤の加工方法としては、強酸（通常は、３Ｎ塩酸）や強アルカリを用いて胎盤を加水分解し、その産物を得る方法が用いられてきた。しかし、この方法は、長時間高温処理を行う過程で胎盤が持っている各種アミノ酸などの生理活性物質が破壊してしまう問題がある。また、従来の酵素を用いた胎盤加工方法は、有効成分の抽出に長時間を要する問題があり、その問題を改善できる方法の開発が必要なのが実情である。
【０００５】
韓国特許出願第２０００－００４３５８８号では、肝癌の治療及び予防を目的として
紫河車（胎盤）加水分解物を用いているが、人体の胎盤からサイトカイン、アミノ酸、核酸塩基、糖質などの各種生体活性成分を抽出した紫河車加水分解物を用いている。ここでは、紫河車をアセトンで処理して脱脂した後、不完全な加水分解物が生成しないように、ペプシンと塩酸で処理する十分な加水分解処理を行うことが記載されているが、詳細な製造方法については記載されていない。
【０００６】
韓国特許出願第２００７－００６５７７９号では、胎盤にアセトンおよび定量の精製水を添加して４０℃で３～５時間脱脂反応させ、その脱脂反応の産物を８０℃で８時間乾燥して脱脂胎盤粉末を得ており、胎盤粉末から、ｉ）胎盤粉末４０～６０重量部に対して、タンパク質分解酵素０．５～８重量部および水３０～６０重量部を添加して加水分解するステップと、ｉｉ）前記加水分解の産物を減圧濃縮するステップと、ｉｉｉ）前記減圧濃縮物を凍結乾燥するステップとを含む胎盤由来の化粧品または健康機能食品原料用の組成物の製造方法を記載している。しかし、本件先行発明の実施例では、ヒトの胎盤ではないブタの胎盤を用いており、また酸追加加水分解法で得られた胎盤抽出物に比べてタンパク分解酵素法による胎盤抽出物のアミノ酸含有量が高いことを記載しているが、タンパク質の分解過程以外の他のステップについては比較や分析を行っていない。
【０００７】
胎盤の具体的な成分は正確に知られていないが、先行韓国特許出願第２００３－００００１７３号では、正常分娩した産婦の紫河車をアセトンで脱脂し、塩酸で加水分解して、１．０ミリリットル当たり５６ミリグラム以上の水溶性物質を含有し、定量を行った場合、アルギニン０．０１重量％、リジン０．０２重量％、フェニルアラニン０．０９重量％、チロシン０．０４重量％、ロイシン０．１１重量％、イソロイシン０．０１重量％、メチオニン０．０２重量％、バリン０．０２重量％、グリシン０．０２重量％、プロリン０
．０１重量％、グルタミン酸０．０２重量％、セリン０．０３重量％、トレオニン０．０２重量％、アスパラギン酸０．２１重量％以上のアミノ酸を含有し、全窒素０．１７２～０．８１６ｗ／ｖ％を含有することを記載している。
【０００８】
タンパク質やペプチドの存在有無についての分析には、一般にＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳｏｄｉｕｍＤｏｄｅｃｙｌＳｕｌｆａｔｅＰｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法を用いる。これは、電気泳動装置を用いてタンパク質を分子量によって分離する定性分析方法であって、主要なタンパク質の存在を確認する方法である。ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、アクリルアミド（Ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）成分の含有量とグリシン（Ｇｌｙｃｉｎｅ）またはトリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）を原料としてタンパク質とペプチドの分離に適用している。トリス－グリシン（Ｔｒｉｓ－ｇｌｙｃｉｎｅ）ゲルの場合は、分子量１０ｋＤａ～３００ｋＤａのタンパク質の分離に有用であり、トリス－トリシン（Ｔｒｉｓ－ｔｒｉｃｉｎｅ）ゲルの場合は、分子量２ｋＤａ～２０ｋＤａのペプチドの分離に有用である。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分離したタンパク質／ペプチドは、クマシー染色法（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅｓｔａｉｎｉｎｇ）によって最終タンパク質の有無を確認する。最近では、ゲル・イメージング・プログラム（Ｇｅｌｉｍａｇｅｐｒｏｇｒａｍ）を用いてＰＡＧＥで分離されたタンパク質の含有量を数値化することもあるが、バンド分離と染色法のバンド飽和（ｂａｎｄｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）などの理由で、正確なタンパク質の含有量分析方法としては適用しにくい。分子量２ｋＤａ以下のペプチドは、ＬＣ－ＭＳ分析法によりペプチドの存在有無を確認することができる。
【０００９】
胎盤加水分解物の製造過程の中で酸加水分解過程が行われるが、これはヒトの胎盤内にペプチドまたはアミノ酸が多数存在し得ることを意味する。現在まで知られているペプチドの配列決定には、質量分析計（ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ；ＥｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙＩｏｎｉｚａｔｉｏｎ）を通常使用している。胎盤加水分解物中に存在するタンパク質またはペプチドは、前記方法によって確認分析が可能である。最終的には胎盤加水分解物中に含まれているタンパク質またはペプチドについてＳＤＳ－ＰＡＧＥ法で存在有無を確認し、ＬＣ－ＭＳ法によって低分子量のペプチドの存在と含有量を分析することにより、胎盤加水分解物中に含まれているタンパク質とペプチドを全て確認することができる。
【００１０】
胎盤中には、様々な人体の生理作用に影響を与えることが知られているミネラルが含まれていると推定される。ミネラルとしては、鉄粉、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレンなどが代表的に知られている。粉乳や健康機能食品、そして医薬品中のミネラル含有量の分析法としては様々な方法が知られている。代表的な方法として、大韓薬典中の一般試験法に相当する方法を参考にすると、標準液を濃度別に製造して各濃度に相当する吸光度値で検量線を得、その検量線グラフ上の試料の吸光度値を読み取って試料中の当該ミネラル成分の含有量を確認する方法がある。
（【００１１】以降は省略されています）

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