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公開番号2025138286
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-25
出願番号2024037291
出願日2024-03-11
発明の名称核酸増幅方法
出願人国立大学法人九州大学
代理人弁理士法人三枝国際特許事務所
主分類C12Q 1/6844 20180101AFI20250917BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】簡便に核酸を増幅させることができる核酸増幅方法を提供すること。
【解決手段】下記成分(A)～(F)を混合する工程を有する、核酸増幅方法。
成分(A):一本鎖DNA
成分(B):プライマー
成分(C):塩基特異的ニッキング酵素
成分(D):dATP、dTTP、dCTP及びdGTPからなる塩基材料
成分(E):前記塩基特異的ニッキング酵素が認識する非典型塩基を含む塩基材料
成分(F):DNAポリメラーゼ
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
下記成分（Ａ）～（Ｆ）を混合する工程を有する、核酸増幅方法。
成分（Ａ）：一本鎖ＤＮＡ
成分（Ｂ）：プライマー
成分（Ｃ）：塩基特異的ニッキング酵素
成分（Ｄ）：ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及びｄＧＴＰからなる塩基材料
成分（Ｅ）：前記塩基特異的ニッキング酵素が認識する非典型塩基を含む塩基材料
成分（Ｆ）：ＤＮＡポリメラーゼ
続きを表示（約 230 文字）【請求項２】
前記成分（Ｃ）は、核酸配列上のウラシル及び／又はヒポキサンチンを認識し、切断する酵素である、請求項１に記載の核酸増幅方法。
【請求項３】
前記成分（Ｆ）は、鎖置換型ＤＮＡポリメラーゼである、請求項１に記載の核酸増幅方法。
【請求項４】
請求項１～３の何れか１項に記載の核酸増幅方法を行うための、核酸増幅用キット。
【請求項５】
前記成分（Ｃ）及び（Ｅ）を含む、請求項４に記載の核酸増幅用キット。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸増幅方法に関する。
続きを表示（約 1,000 文字）【背景技術】
【０００２】
従来より、学術研究及び臨床検査などにおいて、核酸検体の詳細を解析するために当該検体を増幅させる方法が提案されてきた。
【０００３】
中でも、ＰＣＲ法（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）は、広く一般的に知られる核酸増幅方法である。
【０００４】
しかしながら、ＰＣＲ法には、二本鎖ＤＮＡを一本鎖ＤＮＡとするための熱変性工程、プライマーを前記一本鎖ＤＮＡ中のターゲットとなる配列にハイブリダイズさせるためのアニーリング工程、さらに前記プライマー配列を起点として二本鎖ＤＮＡを伸長させていくための伸長工程が存在し、それぞれに反応温度も異なる。
【０００５】
こうしたＰＣＲ法に基づく反応を進行させるためには、正確に反応温度を制御することのできる特殊な機器が必要であり、上記プライマー設計の煩雑さもあいまって、ＰＣＲ法は高コスト及び煩雑なものとなりがちである。
【０００６】
近年では、上記ＰＣＲ法ほどには厳格な温度調節が要求されない、いわゆる「等温核酸増幅法」が提案されている。等温核酸増幅法ではＰＣＲ法ほどに高額な機器は不要だが、それでもなお、より簡便な手法が切望されている。
【０００７】
これまでにＬＡＭＰ法、ＲＣＡ法、ＲＰＡ法、ＳＤＡ法などの等温核酸増幅法が開発されてきた。これら手法では、効率的な増幅を達成するために種々の改良が実施されている。
【０００８】
例えば、ＬＡＭＰ法において４種類のプライマーに２種のプライマーを追加する手法が報告されている。また、ＲＣＡ法において増幅核酸に配列特異的ニッカーゼの認識配列を挿入することで増幅を促進する手法が開発されている。
【０００９】
しかし、これらの手法は標的核酸の配列が既知である場合に有効である。さらに、標的配列特異的なプライマーや配列特異的酵素を調達する必要がある。そこで、標的核酸配列に依存しない手法で効率的に核酸増幅を促進させる方法が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＰｒｏｂｅｓｖｏｌ．１６，２００２，２２３－２２９
Ａｎａｌｙｓｔｖｏｌ．１４０，２０１５，７４－７８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
（【００１１】以降は省略されています）

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