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公開番号2025079845
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-23
出願番号2023192670
出願日2023-11-13
発明の名称キトサンの定量方法及び高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法
出願人日本化薬フードテクノ株式会社,学校法人君が淵学園
代理人個人,個人
主分類C12Q 1/34 20060101AFI20250516BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】操作が簡便で、食品中のキトサンの含有量を正確に定量できるキトサンの定量方法及び高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法の提供。
【解決手段】キトサンを含有する食品中のキトサンを、酸性の水溶液で溶解させる溶解工程と、キトサナーゼを用いて酵素分解する酵素分解工程と、酸を用いてグルコサミンに分解する酸分解工程と、前記グルコサミンを高速液体クロマトグラフィーで定量し、キトサンの含有量を定量する定量工程とを含むことを特徴とするキトサンの定量方法である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
キトサンを含有する食品中のキトサンを酸性の水溶液で溶解させる溶解工程と、
キトサナーゼを用いて酵素分解する酵素分解工程と、
酸を用いてグルコサミンに分解する酸分解工程と、
前記グルコサミンを高速液体クロマトグラフィーで定量し、キトサンの含有量を定量する定量工程と、を含むことを特徴とするキトサンの定量方法。
続きを表示（約 510 文字）【請求項２】
前記溶解工程で用いる前記酸性の水溶液が酢酸水溶液である請求項１に記載のキトサンの定量方法。
【請求項３】
前記酸分解工程で用いる前記酸が塩酸である請求項１に記載のキトサンの定量方法。
【請求項４】
前記酸分解工程の後、活性炭処理を行う活性炭処理工程を含む請求項１から３のいずれかに記載のキトサンの定量方法。
【請求項５】
高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法であって、
キトサンを含有する食品中のキトサンを酸性の水溶液で溶解させる溶解工程と、
キトサナーゼを用いて酵素分解する酵素分解工程と、
酸を用いてグルコサミンに分解する酸分解工程と、を含むことを特徴とする方法。
【請求項６】
前記溶解工程で用いる前記酸性の水溶液が酢酸水溶液である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記酸分解工程で用いる前記酸が塩酸である請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記酸分解工程の後、活性炭処理を行う活性炭処理工程を含む請求項５から７のいずれかに記載の方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、キトサンの定量方法及び高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法に関する。
続きを表示（約 2,100 文字）【背景技術】
【０００２】
キトサンは甲殻類、昆虫類、菌類に広く存在するキチンの脱アセチル化した物質で、多糖類に分類される。キトサンは希酸に可溶性を示す物ではその難消化性から、いわゆる食物繊維の効果が期待され、特にキトサンは多くのアミノ基をもつ為、消化管内で胆汁酸を吸着しコレステロールの吸収阻害並びに胆汁酸の再吸収阻害効果により、優れた血清コレステロールの低下作用を示す。
【０００３】
この様に優れた食物繊維素材であるキトサンは天然に存在するが、食品に添加しその効果を発揮するよう設計された食品は、食物繊維摂取不足である現代に於いて重要であると思われる。従ってその含有量を正確に定量する事は栄養学的観点から重要なことであり、このような背景のもと、食品中のキトサンの定量方法が提案されている（例えば、特許文献１及び２）。
【０００４】
特許文献１では、消化酵素を用いて検体からキトサン以外を除去し（プロスキー法）、酸での加水分解によりグルコサミンに分解し、インドール塩酸法を用いて比色定量することによってキトサンを定量する方法が開示されている。図１は、特許文献１に記載されている、従来法のキトサンの定量方法のフローチャートである。特許文献２では、リン酸を含まないＴｒｉｓ－酢酸緩衝液を用いたプロスキー法でキトサンを含む食物繊維を回収する工程と、食物繊維をセライトの引いてないグラスフィルターで回収し、恒量を測定して食物繊維量を算出する工程を含み、インドール塩酸法によってキトサンを定量する方法が開示されている。
【０００５】
しかしながら、従来技術で用いられているインドール塩酸法ではキトサンの分解物であるグルコサミンだけでなく、ヘキソサミンに属するアミノ糖も発色するため、得られる定量値はキトサンの正確な含有量ではないことが問題視されている。また、従来技術では工程数が多く、操作性が複雑であるため、定量値の再現性が低いことが課題であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
特許第２８８５３５３号公報
特開２００４－２０２６６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、操作が簡便で、食品中のキトサンの含有量を正確に定量できるキトサンの定量方法及び高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞キトサンを含有する食品中のキトサンを酸性の水溶液で溶解させる溶解工程と、
キトサナーゼを用いて酵素分解する酵素分解工程と、
酸を用いてグルコサミンに分解する酸分解工程と、
前記グルコサミンを高速液体クロマトグラフィーで定量し、キトサンの含有量を定量する定量工程と、を含むことを特徴とするキトサンの定量方法である。
＜２＞前記溶解工程で用いる前記酸性の水溶液が酢酸水溶液である＜１＞に記載のキトサンの定量方法である。
＜３＞前記酸分解工程で用いる前記酸が塩酸である＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のキトサンの定量方法である。
＜４＞前記酸分解工程の後、活性炭処理を行う活性炭処理工程を含む＜１＞から＜３＞のいずれかに記載のキトサンの定量方法である。
＜５＞高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法であって、
キトサンを含有する食品中のキトサンを酸性の水溶液で溶解させる溶解工程と、
キトサナーゼを用いて酵素分解する酵素分解工程と、
酸を用いてグルコサミンに分解する酸分解工程と、を含むことを特徴とする方法である。
＜６＞前記溶解工程で用いる前記酸性の水溶液が酢酸水溶液である＜５＞に記載の方法である。
＜７＞前記酸分解工程で用いる前記酸が塩酸である＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の方法である。
＜８＞前記酸分解工程の後、活性炭処理を行う活性炭処理工程を含む＜５＞から＜７＞のいずれかに記載の方法である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、操作が簡便で、食品中のキトサンの含有量を正確に定量できるキトサンの定量方法及び高速液体クロマトグラフィーによるキトサンの定量分析に用いる試料の調製方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
図１は、従来法のキトサンの定量方法のフローチャートを示す図である。
図２は、本発明の一実施形態に係るキトサンの定量方法のフローチャートを示す図である。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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