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公開番号2025090637
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-17
出願番号2025032073,2023040466
出願日2025-02-28,2018-06-15
発明の名称シヌクレイノパチーの治療のためのアルファ-シヌクレインタンパク質のC末端からのペプチド免疫原及びその製剤
出願人ユナイテッドニューロサイエンス,UNITED NEUROSCIENCE
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 14/47 20060101AFI20250610BHJP(有機化学)
要約【課題】アルファ-シヌクレインペプチド免疫原コンストラクト、コンストラクトを含む組成物、コンストラクトにより誘発される抗体、ならびにコンストラクト及びその組成物を作製及び使用する方法を提供する。
【解決手段】アミノ酸G111近辺からアミノ酸D135近辺までに対応するアルファ-シヌクレインのC末端フラグメントからの約10から約25アミノ酸残基を含むB細胞エピトープと、複数の特定のアミノ酸配列の群から選択されるTヘルパーエピトープと、アミノ酸Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α,ε-N)Lys、及びε-N-Lys-Lys-Lys-Lysからなる群から選択される必要に応じた異種スペーサーと、を含み、B細胞エピトープが、Tヘルパー細胞エピトープに直接または異種スペーサーを介して共有結合している、アルファ-シヌクレインペプチド免疫原コンストラクトが提供される。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
アルファ－シヌクレイン（α－Ｓｙｎ）ペプチド免疫原コンストラクトであって、
配列番号１のアミノ酸Ｇ１１１近辺からアミノ酸Ｄ１３５近辺までに対応するα－ＳｙｎのＣ末端フラグメントからの約１０から約２５アミノ酸残基を含む、Ｂ細胞エピトープと；
配列番号７０～９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＴヘルパーエピトープと；
アミノ酸Ｌｙｓ－、Ｇｌｙ－、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－、（α，ε－Ｎ）Ｌｙｓ、及びε－Ｎ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ（配列番号１４８）からなる群から選択される必要に応じた異種スペーサーと、を含み、
前記Ｂ細胞エピトープが、前記Ｔヘルパー細胞エピトープに直接または前記必要に応じた異種スペーサーを介して共有結合している、前記α－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
続きを表示（約 1,000 文字）【請求項２】
前記Ｂ細胞エピトープが、配列番号１２～１５、１７、及び４９～６３からなる群から選択される、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項３】
前記Ｔヘルパーエピトープが、配列番号８１、８３、及び８４からなる群から選択される、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項４】
前記必要に応じた異種スペーサーが、（α，ε－Ｎ）Ｌｙｓまたはε－Ｎ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ（配列番号１４８）である、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項５】
前記Ｔヘルパーエピトープが、前記Ｂ細胞エピトープのアミノ末端に共有結合している、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項６】
前記Ｔヘルパーエピトープが、前記Ｂ細胞エピトープのアミノ末端に前記必要に応じた異種スペーサーを介して共有結合している、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項７】
以下の式：
（Ｔｈ）
ｍ
－（Ａ）
ｎ
－（α－ＳｙｎのＣ末端フラグメント）－Ｘ
または
（α－ＳｙｎのＣ末端フラグメント）－（Ａ）
ｎ
－（Ｔｈ）
ｍ
－Ｘ
を含み、
式中、
Ｔｈは前記Ｔヘルパーエピトープであり、
Ａは前記異種スペーサーであり、
（α－ＳｙｎのＣ末端フラグメント）は、前記Ｂ細胞エピトープであり、
Ｘはアミノ酸のα－ＣＯＯＨまたはα－ＣＯＮＨ
２
であり、
ｍは、１から約４であり、
ｎは１から約１０である、
請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項８】
配列番号１０７、１０８、１１１～１１３、及び１１５～１４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項９】
配列番号１０７、１０８、及び１１１～１１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクト。
【請求項１０】
請求項１に記載のα－Ｓｙｎペプチド免疫原コンストラクトを含む、組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年６月１６日に出願された米国仮出願第６２／５２１，２８７号の権益を主張するＰＣＴ国際出願であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 3,000 文字）【０００２】
本開示は、シヌクレイノパチーの治療のためのアルファ－シヌクレイン（α－Ｓｙｎ）タンパク質のＣ末端に基づくペプチド免疫原コンストラクト及びその製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
シヌクレインタンパク質（ウェブサイト：ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｓｙｎｕｃｌｅｉｎにおいて概説される）は、主に神経組織及び特定の腫瘍で発現する脊椎動物に共通の可溶性タンパク質のファミリーである。シヌクレインファミリーには、３つの既知のタンパク質：アルファ－シヌクレイン（ウェブサイト：ｅn.wikipedia.org/wiki/Alpha-synucleinにおいて概説される）、ベータ－シヌクレイン（ウェブサイト：en.wikipedia.org/wiki/Beta-synucleinにおいて概説される）、及びガンマ－シヌクレインが含まれる。すべてのシヌクレインは、交換可能なアポリポタンパク質のクラスＡ２脂質結合ドメインと類似性のある、高度に保存されたアルファヘリックス脂質結合モチーフを共有している。一部のデータは膜安定性及び／または代謝回転の調節における役割を示唆しているが、正常な細胞機能はシヌクレインタンパク質のいずれについても決定されていない。
【０００４】
全長アルファ－シヌクレインタンパク質（α－Ｓｙｎ）は１４０アミノ酸のタンパク質（受託番号ＮＰ＿０００３３６）であり、ＳＮＣＡ遺伝子によってコードされている。選択的スプライシングにより、少なくとも３つのα－Ｓｙｎのアイソフォームが生成される。主な形態は、完全長のタンパク質である。他のアイソフォームは、エクソン３の喪失により残基４１～５４が欠如しているα－Ｓｙｎ－１２６、及びエクソン５の喪失により残基１０３～１３０が欠如しているα－Ｓｙｎ－１１２である。
【０００５】
α－Ｓｙｎの一次構造は、通常３つの異なるドメインに分けられる：（１）残基１～６０：アポリポタンパク質結合ドメインに類似した構造的アルファヘリックス傾向を有するコンセンサス配列ＫＴＫＥＧＶを含む４つの１１残基リピートが支配的な両親媒性Ｎ末端領域；（２）残基６１～９５：タンパク質凝集に関与する非アミロイドβコンポーネント（ＮＡＣ）領域を含む中央の疎水性領域；（３）残基９６～１４０：明確な構造的傾向を有さない高酸性のプロリンに富む領域。ＮＡＣ領域の３５アミノ酸のα－Ｓｙｎフラグメントは、アミロイドに富む画分にＡβとともに存在することが発見された。ＮＡＣは、その前駆体タンパク質である、現在ヒトのα－Ｓｙｎと呼ばれる、ゴマフシビレエイ（Torpedo californica）からのシヌクレインの全長ヒト相同体であると後に決定された、ＮＡＣＰのフラグメントであることが後に示された。
【０００６】
ＨＰＬＣで精製されたα－Ｓｙｎのｉｎｖｉｔｒｏでの高分解能イオン移動度質量分析（ＩＭＳ－ＭＳ）の使用により、α－Ｓｙｎが自己タンパク質分解性（自己タンパク質分解性）であり、インキュベーション時にさまざまな低分子量フラグメントを生成することが示された。１４．４６ｋＤａの完全長タンパク質は、Ｃ末端及びＮ末端の短縮化によって形成される１２．１６ｋＤａフラグメント（アミノ酸１４～１３３）及び１０．４４ｋＤａフラグメント（アミノ酸４０～１４０）、ならびに７．２７ｋＤａフラグメント（アミノ酸７２～１４０）を含む多数の小さなフラグメントを生成することが見出された。ＮＡＣ領域の大部分を含む７．２７ｋＤａフラグメントは、全長α－Ｓｙｎよりもかなり速く凝集することが示された。これらの自己タンパク質分解性産物は、α－Ｓｙｎの凝集における中間体または補因子としての役割を果たす可能性がある。
【０００７】
α－Ｓｙｎは、ヒトの脳で豊富であり、脳及びグリア細胞の細胞質にあるすべてのタンパク質の１％を占めている。α－Ｓｙｎは、新皮質、海馬、歯状回、嗅球、線条体、視床、及び小脳で広く発現している。また、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞、ならびに単球及び血小板を含む造血細胞でも高度に発現している。少量のα－Ｓｙｎが心臓、筋肉、及びその他の組織で見出される。脳では、α－Ｓｙｎは主にシナプス前終末と呼ばれる特殊な構造の神経細胞（ニューロン）の先端に見出される。これらの構造内で、α－Ｓｙｎはリン脂質及びタンパク質と相互作用する。シナプス前終末は、シナプス小胞として知られているコンパートメントから、ドーパミンなどの神経伝達物質と呼ばれる化学メッセンジャーを放出する。神経伝達物質の放出は、ニューロン間の信号を中継し、認知を含む正常な脳機能にとって重要である。
【０００８】
溶液中のα－Ｓｙｎは、単一の安定した３Ｄ構造を欠いているという点で、天然変性タンパク質であると考えられている。α－Ｓｙｎはチューブリンと顕著に相互作用し、α－Ｓｙｎはタウのような潜在的な微小管関連タンパク質としての活性を持つ可能性があることが示されている。α－Ｓｙｎは古典的に非構造化可溶性タンパク質であると考えられてきたが、非変異α－Ｓｙｎは凝集に抵抗する安定に折り畳まれた四量体を形成する。それにもかかわらず、α－Ｓｙｎは凝集して、レビー小体を特徴とする病態において不溶性原線維を形成し得る。これらの障害はシヌクレイノパチー（ウェブサイト：en.wikipedia.org/wiki/Synucleinopathiesにおいて概説される）として知られている。
【０００９】
シヌクレイノパチーは、共通の病理学的特徴を共有する神経変性障害の多様なグループであり、神経病理学的検査では、不溶性のα－Ｓｙｎの異常な凝集体を含む特徴的な病変が、ニューロン及びグリア細胞の選択的脆弱集団に存在する。最も一般的なシヌクレイノパチーには、パーキンソン病（ＰＤ）、認知症を伴うパーキンソン病（ＰＤＤ）、及びレビー小体を伴う認知症（ＤＬＢ）などのレビー小体障害（ＬＢＤ）、ならびに多系統萎縮症（ＭＳＡ）または脳鉄蓄積型Ｉ（ＮＢＩＡタイプＩ）の神経変性が含まれる。これらの疾患の現在の治療選択肢には、Ｌ－ドーパなどの対症療法薬、抗コリン薬、及びモノアミンオキシダーゼの阻害薬が含まれる。しかしながら、現在のすべての治療の機会は、症候性の緩和につながるだけであり、患者に長期にわたる疾患修飾効果を誘発するものではない。
【００１０】
ＬＢＤは、振戦、硬直、運動緩慢、及び脳内のドーパミン作動性ニューロンの喪失を特徴とする進行性の神経変性障害である。ＤＬＢ及びＰＤＤの場合、兆候には認知障害も含まれる。西欧諸国の６０歳を超える人口の２％までがＰＤ／ＬＢＤの典型的な兆候を示す。遺伝的感受性と環境因子が疾患の発症に関与しているらしい。この疾患に苦しむ患者は、特にドーパミン作動性ニューロンまたはニューロン突起の含有量が高い領域の脳の皮質及び皮質下領域に、レビー小体（ＬＢ）と呼ばれる特徴的な細胞内封入体を発達させる。ＬＢＤでは、α－Ｓｙｎは影響を受ける脳領域全体のＬＢに蓄積する。さらに、α－Ｓｙｎ遺伝子の単一の点変異、及び重複または増殖は、まれな家族型のパーキンソン症候群と関連していることが実証できた。
（【００１１】以降は省略されています）

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