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公開番号2025082445
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-29
出願番号2023195765
出願日2023-11-17
発明の名称活性型IL-18検出キット、及び検査方法
出願人株式会社mAbProtein,国立大学法人長崎大学,国立大学法人東海国立大学機構
代理人個人
主分類G01N 33/53 20060101AFI20250522BHJP(測定;試験)
要約【課題】活性型IL-18のみを検出することのできる簡便な方法、及びキットを提供することを課題とする。
【解決手段】IL-18活性化に伴って生じるネオエピトープを認識する抗体を用いて活性型IL-18のみを免疫学的に測定する方法、及びキットを構築した。IL-18の活性化断端を認識する複数の抗体、及びIL-18を特異的に認識する複数の抗体を用いて検討し、IL-18の活性化断端を認識するモノクローナル抗体9-10.2、及びIL-18を特異的に認識するウサギポリクローナル抗体の組み合わせが最も検出感度良く活性型IL-18を検出することを明らかにした。この組み合わせによる免疫学的測定法、及び測定キットによれば、pgレベルの低濃度の活性型IL-18を検出することができる。
【選択図】図7

特許請求の範囲【請求項１】
活性型ＩＬ－１８のみを特異的に検出する検査キットであって、
ＩＬ－１８活性型断端を認識するモノクローナル抗体と、
活性型ＩＬ－１８の活性型断端以外の領域を認識する抗体を用いて免疫学的測定法によって検出する検査キット。
続きを表示（約 660 文字）【請求項２】
前記ＩＬ－１８活性型断端を認識するモノクローナル抗体が９－１０．２抗体であり、
前記活性型ＩＬ－１８の活性型断端以外の領域を認識する抗体がポリクローナル抗体であることを特徴とする請求項１記載の検査キット。
【請求項３】
上記検査キットがＥＬＩＳＡキットであり、
９－１０．２抗体を固相化抗体とした場合にはポリクローナル抗体を検出抗体とし、
ポリクローナル抗体を固相化抗体とした場合には、９－１０．２抗体を検出抗体とすることを特徴とする請求項２記載の検査キット。
【請求項４】
活性型ＩＬ－１８のみを特異的に検出する方法であって、
ＩＬ－１８活性型断端を認識するモノクローナル抗体と、
活性型ＩＬ－１８の活性型断端以外の領域を認識する抗体を用いて免疫学的測定法によって検出することを特徴とする検出方法。
【請求項５】
前記ＩＬ－１８活性型断端を認識するモノクローナル抗体が９－１０．２抗体であり、
前記活性型ＩＬ－１８の活性型断端以外の領域を認識する抗体がポリクローナル抗体であることを特徴とする請求項４記載の検出方法。
【請求項６】
上記検出方法がＥＬＩＳＡであり、
９－１０．２抗体を固相化抗体とした場合にはポリクローナル抗体を検出抗体とし、
ポリクローナル抗体を固相化抗体とした場合には、９－１０．２抗体を検出抗体とすることを特徴とする請求項５記載の検出方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性型ＩＬ－１８を特異的に認識するキット、及び検査方法に関する。特に、臨床で広く用いられているＥＬＩＳＡキットに関する。
続きを表示（約 2,600 文字）【背景技術】
【０００２】
ＩＬ－１８は種々の疾患への関与が示唆されている。ＩＬ－１８は、ＩＬ－１βファミリーのサイトカインであり、主としてマクロファージで発現しているが、樹状細胞、上皮細胞、ケラチノサイトなど様々な細胞で発現している。また、ＩＬ－１８受容体はＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞の他、Ｂ細胞、好中球、マクロファージ、血管内皮細胞、平滑筋細胞など様々な細胞で発現している。ＩＬ－１８発現細胞、受容体発現細胞の多様性は、ＩＬ－１８の機能の多様性を示しており、種々の免疫系に関与していることが知られている。
【０００３】
免疫系への広い関与から、ＩＬ－１８の過剰発現で発症、増悪するＩＬ－１８関連疾患には、様々な疾患が含まれている。例えば、成人発症スチル病（ＡＯＳＤ）、全身型若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、膵がん、肺がん、大腸がんなどの悪性腫瘍、クリオピリン関連周期熱症候群、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、若年性突発性関節炎（ＪＩＡ）、気管支喘息、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、輸血関連肺傷害、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、特発性肺線維症、嚢胞性線維症、関節リウマチ、代謝性骨疾患、肝臓及び腸管での重篤な臓器傷害、心不全、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、眼球乾燥症（ＤＥＤ）、角膜炎、角膜血管新生、病的眼球内血管新生、虹彩炎、緑内障、黄斑変性症、シェーグレン症候群、自己免疫性ブドウ膜炎、ベーチェット病、結膜炎、アレルギー性結膜炎、眼瞼皮膚炎、アレルギー性鼻炎、２型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎、虚血再灌流傷害、家族性地中海熱、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群、高ＩｇＤ症候群、痛風、シュニッツラー症候群、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症からなるＡＮＣＡ関連血管炎、橋本病、クローン病、潰瘍性大腸炎、免疫グロブリン－４（ＩｇＧ４）関連疾患、肺動脈高血圧症、アトピー性皮膚炎、ＮＬＲＣ４関連自己炎症性疾患（あるいはＮＬＲＣ４インフラマソーム症）などが含まれると言われている。
【０００４】
ＩＬ－１８は、ＴＮＦなどのサイトカインとは異なり、多くの細胞ではｍＲＮＡレベルでの産生調節を受けず、活性のない前駆体（ｐｒｏ－ＩＬ－１８）として細胞内に豊富に存在する。ｐｒｏ－ＩＬ－１８は、カスパーゼ１（ｃａｓｐａｓｅ－１）、又はカスパーゼ４によって前駆体が切断されることで、活性型となり細胞外に放出される。したがって、ｍＲＮＡ発現量や、細胞内の前駆体タンパク質の測定を行っても、ＩＬ－１８の活性を測定することにはならず、ＩＬ－１８の機能解析を行うためには、カスパーゼによって切断された活性型ＩＬ－１８を解析することが必須である。
【０００５】
上述のように、ＩＬ－１８の関与が示唆される疾患は数多くあるが、活性型ＩＬ－１８のみが測定されていたわけではなく、前駆体ＩＬ－１８のみを検出した例も多く含まれ、その関与の程度の詳細も明らかにはなっていない。従来からウエスタンブロット法で、分子量により活性型、前駆体ＩＬ－１８を区別し、活性型ＩＬ－１８を検出することが試みられている。しかし、ウエスタンブロット法では、１ｍｌ中にｐｇ程度しか含まれないＩＬ－１８を検出することは不可能であり、ＩＬ－１８の関与が疑われる疾患であっても、臨床現場で活性型ＩＬ－１８の存在が検査されるには至っていない。
【０００６】
本発明者らは、活性型ＩＬ－１８のみを認識する抗体を作製し、その炎症性腸炎の治療への応用について開示している（特許文献１、２）。ＩＬ－１８関連疾患において、活性型ＩＬ－１８の増加を解析することは、活性型ＩＬ－１８を中和可能な抗体医薬による治療効果予測につながることから、患者血清中の活性型ＩＬ－１８を精度よく、かつ簡便に測定する方法が必要である。そのため活性型のＩＬ－１８のみを認識する抗体を用いることによって、ＥＬＩＳＡなど、臨床で広く用いられている方法により、活性型ＩＬ－１８のみを検出することが求められていた。しかしながら、実際には、活性型ＩＬ－１８を感度良く検出するキットを構築することができなかった。
【０００７】
活性型ＩＬ－１８を認識する抗体を使用しているにもかかわらず、精度よく活性型ＩＬ－１８を検出できないのは、検体に含まれる活性型ＩＬ－１８の濃度が低いだけではなく、前駆体ＩＬ－１８が非常に多く含まれていることが一因であると考えられる。そのため、活性型ＩＬ－１８のみを認識する抗体を用いても検出感度が低く、臨床検査として実用化するには至らなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
国際公開第２０２０／１１６４２３号
国際公開第２０２３／２８６６９４号
国際公開第２０１２／１２４６８３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述のように、今まで活性型ＩＬ－１８のみを簡便に測定する方法はなかった。本発明は、活性型ＩＬ－１８のみを検出することのできる簡便な方法、及びキットを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
以下の検出キット、検出方法により、活性型ＩＬ－１８を感度良く検出することができる。
（１）活性型ＩＬ－１８のみを特異的に検出する検査キットであって、ＩＬ－１８活性型断端を認識するモノクローナル抗体と、活性型ＩＬ－１８の活性型断端以外の領域を認識する抗体を用いて免疫学的測定法によって検出する検査キット。
活性型ＩＬ－１８のみを特異的に検出することは、ＩＬ－１８関連疾患における活性型ＩＬ－１８の関与を解析するうえでも、今後活性型ＩＬ－１８抗体を用いた治療を行ううえでも必要とされていた。しかし、血清中の活性型ＩＬ－１８濃度が非常に低いことや、細胞内に前駆体が多く含まれることから、実用化されたキットは今までなかった。本発明者らは、ＩＬ－１８活性型断端を認識するモノクローナル抗体を作製し、これによりキットの開発に成功した。
（【００１１】以降は省略されています）

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