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公開番号2025118617
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-13
出願番号2025061908,2022020496
出願日2025-04-03,2014-07-31
発明の名称アフコシル化された抗FGFR2IIIB抗体
出願人ファイヴプライムセラピューティクスインク
代理人弁理士法人川口國際特許事務所
主分類C07K 16/28 20060101AFI20250805BHJP(有機化学)
要約【課題】FGFR2IIIbに結合する抗体を含む組成物を提供する。
【解決手段】複数の抗FGFR2IIIb抗体を含む組成物であって、各抗FGFR2IIIb抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域がそれぞれ特定のアミノ酸配列を含む(i)HVR-H1、(ii)HVR-H2、及び(iii)HVR-H3を含み、かつ軽鎖可変領域がそれぞれ特定のアミノ酸配列を含む(iv)HVR-L1、(v)HVR-L2、及び(vi)HVR-L3を含み、組成物中の抗FGFR2IIIb抗体の少なくとも95%がアフコシル化されている、組成物である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
複数の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物であって、
各抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、
重鎖可変領域が
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ
軽鎖可変領域が
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み、
組成物中の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されている、
組成物。
続きを表示（約 640 文字）【請求項２】
重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
軽鎖可変領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
重鎖が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１～４の何れか一項に記載の組成物。
【請求項６】
軽鎖が配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１～５の何れか一項に記載の組成物。
【請求項７】
重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖が配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
複数のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物であって、
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合する、組成物。
【請求項９】
抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～８何れか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
抗体が、キメラ抗体である、請求項１～９の何れか一項に記載の組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
アフコシル化された抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が提供される。
続きを表示（約 5,700 文字）【背景技術】
【０００２】
線維芽細胞増殖因子（ＥＧＦ）ファミリーメンバーは、様々な程度で異なるＦＧＦＲに
結合する異なるＦＧＦにより、４種のチロシンキナーゼ受容体である線維芽細胞増殖因子
受容体１～４（ＦＧＦＲ１～４）、及びそれらのアイソフォームに結合する（Zhang et a
l., J. Biol. Chem. 281:15694, 2006）。ヒトＦＧＦＲ２のタンパク質配列は、例えば、
ＧｅｎＢａｎｋローカスＡＦ４８７５５３に提供されている。各ＥＧＦＲは、３種の免
疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン（Ｄ１、Ｄ２及びＤ３）を含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ
）、一回膜貫通へリックス、及び細胞内触媒キナーゼドメインからなる（Mohammadi et a
l., Cytokine Growth Factor Revs, 16:107, 2005）。Ｄ１及びＤ２の間のリンカーには
、「アシッド・ボックス（ａｃｉｄｂｏｘ）」（ＡＢ）と呼ばれる隣接するアミノ酸の
範囲がある。Ｄ１及びＡＢを含む領域は、リガンドへの結合により緩和される、受容体の
自己制御に関与すると考えられている。ＦＧＦは、主に受容体のＤ２及びＤ３における領
域を介して受容体に結合する。ＦＧＦＲは、様々なアイソフォームをもたらす、そのｍＲ
ＮＡの複数の選択的スプライシングにより特徴づけられる（Ornitz et al., J. Biol. Ch
em. 271:15292, 1996; ＦＧＦＲ２及びそのアイソフォームについてＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏ
ｔＰ２１８０２及びアイソフォームＰ２１８０２－１からＰ２１８０２－２０も参照の
こと）。とりわけ、３種全てのＩｇドメインを含むフォーム（αアイソフォーム）、又は
Ｄ１を含まず、Ｄ２及びＤ３ドメインの２種のＩｇドメインのみを含むフォーム（βアイ
ソフォーム）がある。ＦＧＦＲ１～ＦＧＦＲ３において、全てのフォームが、ＩＩＩａと
示されるＤ３の前半部分を含むが、２つの代替的エクソンがＤ３の後半部分に使用される
ことができ、これにより、ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃフォームが得られる。ＦＧＦＲ２につい
て、これらは、それぞれＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ（又は、単にＦＧＦ
Ｒ２ｂ及びＦＧＦＲ２ｃ）と示され；対応するベータフォームは、ＦＧＦＲ２（ｂｅｔａ
）ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２（ｂｅｔａ）ＩＩＩｃと示される。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ（Ｋ－
ｓａｍ－Ｉとも示される）は、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２の両方によく結合するもののＫＧＦ
ファミリーメンバーには結合しないが、ＦＧＦＲ２（Ｋ－ｓａｍ－ＩＩとも示される）の
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂフォームは、ＦＧＦ１及びＫＧＦファミリーメンバー（ＦＧＦ７、Ｆ
ＧＦ１０、及びＦＧＦ２２）の両方に対し高親和性受容体である(Miki et al., Proc. Na
tl. Acad. Sci. USA 89:246, 1992)。実に、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂが、ＫＧＦファミリーメ
ンバーに対する唯一の受容体であり(Ornitz et al., 1996, op. cit.)、そのため、ＫＧ
ＦＲと示されている。
【０００３】
ＦＧＦＲ及びそのアイソフォームは、様々な組織において、異なる発現をする。ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ（及び、ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ３のＩＩＩｂフォーム）は、上皮組織に発
現するが、ＦＧＦＲＩＩＩｃは、間葉組織に発現する(Duan et al., J. Biol. Chem. 267
:16076, 1992; Ornitz et al., 1996, op. cit.)。これらの受容体の特定のＦＧＦリガン
ドは、反対の発現パターンを有する。従って、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ１０、及びＦ
ＧＦ２２を含むＫＧＦサブファミリーメンバーはＦＧＦＲＩＩＩｂのみに結合し(Zhang e
t al., op. cit.)、かつ、間葉組織に発現し、よって、上皮細胞のパラクラインエフェク
ターであってもよい。一方、ＦＧＦ４サブファミリーメンバーＦＧＦ４～６は、ＦＧＦＲ
２ＩＩＩｃに結合し、かつ、上皮及び間葉系の両方において発現し、よって、オートクラ
イン又はパラクライン機能の何れかを有していてもよい。ＦＧＦＲ２のアイソフォーム及
びそのリガンドの発現パターンのために、ＦＧＦＲ２は、上皮－間葉相互作用における役
割を果たし(Finch et al., Dev. Dyn. 203:223, 1995)、そのため、マウスにおけるＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂのノックアウトが、胚性の欠陥及び死亡を引き起こす(De Moerlooze et a
l., Development 127:483, 2000)。
【０００４】
ＫＧＦ（ＦＧＦ７）及びＫＧＦＲ（ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ）は、多くの膵臓がんにおいて
、過剰発現しており(Ishiwata et al., Am. J. Pathol. 153: 213, 1998)、それらの共発
現は、予後の悪さと相関している(Cho et al., Am. J. Pathol. 170:1964, 2007)。ＦＧ
ＦＲ２遺伝子の体細胞変異は、子宮内膜（子宮）癌の大規模パネルの１２％に見いだされ
、様々な試験ケースにおいて、腫瘍細胞生存のために必須あった。２種の腫瘍において、
ＦＧＦＲ２変異は、アペール症候群に関連する、同じＳ２５２Ｗ置換であることが見出さ
れた。ＦＧＦＲ２の増幅と過剰発現は、予後が著しく悪い、未分化型びまん性胃がんと関
連し、低分子化合物によるＦＧＦＲ２活性の阻害は、そのようながん細胞の増殖を強く阻
害した (Kunii et al., Cancer Res. 68:2340, 2008; Nakamura et al., Gastroenterol.
131:1530, 2006)。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
Zhang et al., J. Biol. Chem. 281:15694, 2006
Mohammadi et al., Cytokine Growth Factor Revs, 16:107, 2005
Ornitz et al., J. Biol. Chem. 271:15292, 1996
Miki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:246, 1992
Ornitz et al., 1996, op. cit.
Duan et al., J. Biol. Chem. 267:16076, 1992
Zhang et al., op. cit.
Finch et al., Dev. Dyn. 203:223, 1995
De Moerlooze et al., Development 127:483, 2000
Ishiwata et al., Am. J. Pathol. 153: 213, 1998
Cho et al., Am. J. Pathol. 170:1964, 2007
Kunii et al., Cancer Res. 68:2340, 2008
Nakamura et al., Gastroenterol. 131:1530, 2006
【発明の概要】
【０００６】
いくつかの実施態様において、抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が提供され、重鎖可変領域は
：（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含み；かつ軽鎖可変領域は：（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号１１のア
ミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み；抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実
施態様において、抗体はＡｓｎ２９７でのフコースを欠いている。いくつかの実施態様に
おいて、複数の抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物が提供され、組成物中の各抗ＦＧ
ＦＲ２ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変領域は：（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－
Ｈ１；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号
８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ組成物中の各抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗
体の軽鎖可変領域は：（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｖ）配
列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配
列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み；組成物中の抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されて
いる。いくつかの実施態様において、組成物は、抗体産生細胞株の上清であってもよい。
いくつかの実施態様において、組成物は、緩衝化された組成物である。いくつかの実施態
様において、重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実
施態様において、軽鎖可変領域ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつか
の実施態様において、重鎖可変領域ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含み、かつ
軽鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、
重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、軽鎖が、配列
番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、重鎖が、配列番号２のアミ
ノ酸配列を含み、かつ軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様に
おいて、複数のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体を含む組成物が提供され、抗体は
、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号５のアミノ酸配列を含
む軽鎖可変ドメインを含む抗体と、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対する結合について競合する。
【０００７】
いくつかの実施態様において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様
において、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体で
ある。本明細書に記載の任意の実施態様において、抗体は、κ軽鎖定常領域を含んでもよ
い。本明細書に記載の任意の実施態様において、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含んで
もよい。
【０００８】
いくつかの実施態様において、抗体は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体に比較して、インビトロでの増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつ
かの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体が、フコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体による特異的溶解よりも、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくと
も２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくと
も４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、又は少な
くとも７５パーセントポイント高い特異的溶解を引き起こす。いくつかの実施態様におい
て、ＡＤＣＣ活性が、標的細胞としてＦＧＦＲ２ＩＩＩｂを発現するＢａ／Ｆ３細胞、及
びエフェクター細胞として単離されたヒトＰＢＭＣを使用して決定される。
【０００９】
いくつかの実施態様において、抗体は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化抗ＦＧＦ
Ｒ２ＩＩＩｂ抗体に比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する
。いくつかの実施態様において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体は、フコシル化
抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体よりも、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、
少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１
５倍、少なくとも１７倍、又は少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結
合する。いくつかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、表面プラズモン共鳴を
使用して決定される。いくつかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、Ｆｃガン
マＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される。いく
つかの実施態様において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）
である。
【００１０】
本明細書に記載の任意の実施態様において、抗体は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに結合しても
よいが、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに結合なくてもよい。
（【００１１】以降は省略されています）

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