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公開番号2025124700
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-26
出願番号2025082541,2023567486
出願日2025-05-16,2021-12-17
発明の名称ヒト化抗DNAM-1抗体
出願人国立大学法人筑波大学,TNAX Biopharma株式会社
代理人弁理士法人エスエス国際特許事務所
主分類C07K 16/28 20060101AFI20250819BHJP(有機化学)
要約【課題】本発明は、ヒトDNAM-1に特異的に結合するヒト化抗DNAM-1抗体を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明の一態様は、それぞれ特定のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびそれぞれ特定のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する、ヒト化抗DNAM-1抗体またはその抗原結合断片である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
下記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
ＨＣＤＲ１として配列番号１のアミノ酸配列、ＨＣＤＲ２として配列番号２のアミノ酸配列、およびＨＣＤＲ３として配列番号３のアミノ酸配列、ならびに
下記アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ＬＣＤＲ１として配列番号４のアミノ酸配列、ＬＣＤＲ２として配列番号５のアミノ酸配列、およびＬＣＤＲ３として配列番号６のアミノ酸配列、
を有する、ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
続きを表示（約 850 文字）【請求項２】
配列番号１０と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する、請求項１に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
を有する、請求項１または２に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
重鎖の２３８番目および２３９番目のアミノ酸残基がＡである、請求項１～３のいずれか１項に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
配列番号１４と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１５と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
配列番号１４のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖、または
配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖
を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体。
【請求項７】
請求項１～６のいずれか一項に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸。
【請求項８】
請求項７に記載の核酸を含有するベクター。
【請求項９】
請求項８に記載のベクターを含有する形質転換体。
【請求項１０】
請求項１～６のいずれか１項に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片を含む、自然リンパ球（ＩＬＣ）の活性化抑制剤。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体に関する。
続きを表示（約 3,900 文字）【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡＭ－１は、ＣＤ２２６とも呼ばれる分子量６５ｋＤａの免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着分子であり、ＣＤ４
＋
Ｔ細胞、ＣＤ８
＋
Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、血小板などの造血系細胞に発現する活性化免疫受容体として同定された。
ＤＮＡＭ－１は、そのリガンドであるＣＤ１５５またはＣＤ１１２と結合すると、細胞傷害性のための活性化シグナルを媒介する。ＤＮＡＭ－１は、ヒトやマウスモデルにおいて、様々な炎症性疾患や癌の病態に関与していることが示されている。そして、抗マウスＤＮＡＭ－１モノクローナル抗体は、マウスにおける実験的自己免疫脳炎および急性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症を抑制すること、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞集団を増加させ、その結果、マウスの皮膚移植片の生存期間を延長させること等が報告されている。これらの報告から、抗ＤＮＡＭ－１モノクローナル抗体はこれらの疾患に有用であると考えられている。
本発明者らは、以前にマウス抗ヒトＤＮＡＭ－１モノクローナル抗体を樹立した（特許文献１）。また、ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体についても報告している（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
国際公開公報２０１７／１８３６６５号公報
【非特許文献】
【０００４】
Yumi Yamashita-Kanemaru et.al., Suppression of Th1 and Th17 Proinflammatory Cytokines and Upregulation of FOXP3 Expression by a Humanized Anti-DNAM-1 Monoclonal Antibody, MONOCLONAL ANTIBODIES IN IMMUNODIAGNOSIS AND IMMUNOTHERAPY, Volume 40, Number 2, 2021
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１に記載のマウス抗ヒトＤＮＡＭ－１モノクローナル抗体は、制御性Ｔ細胞を活性化して免疫反応を抑制することから、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、自己免疫疾患、線維化疾患、炎症性腸炎、アレルギー等の予防または治療に使用できるとされている。しかし、特許文献１で樹立されたのはマウス抗体に過ぎず、ヒトにおける治療的価値の点等で、改善の余地が残されていた。
また、ヒト化抗体は、一般的に、その親マウス抗体に比べて標的とする抗原への結合性が低下する、抗原への結合性を維持すると免疫原性が上がりやすい点等で改善の余地があった。
そこで、本発明者らは、新規なマウス抗ヒトＤＮＡＭ－１モノクローナル抗体を取得し、ヒトにおける治療的価値の高いヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体を作製しようと考えた。
本発明は、ヒトＤＮＡＭ－１に特異的に結合するヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した。その結果、以下の構成を有することにより上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、例えば以下の〔１〕～〔１０〕に関する。
〔１〕下記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
ＨＣＤＲ１として配列番号１のアミノ酸配列、ＨＣＤＲ２として配列番号２のアミノ酸配列、およびＨＣＤＲ３として配列番号３のアミノ酸配列、ならびに
下記アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ＬＣＤＲ１として配列番号４のアミノ酸配列、ＬＣＤＲ２として配列番号５のアミノ酸配列、およびＬＣＤＲ３として配列番号６のアミノ酸配列、
を有する、ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
〔２〕配列番号１０と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する、〔１〕に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
〔３〕配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
を有する、〔１〕または〔２〕に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
〔４〕重鎖の２３８番目および２３９番目のアミノ酸残基がＡである、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
〔５〕配列番号１４と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１５と９５％以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、〔１〕～〔４〕のいずれかに記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片。
〔６〕配列番号１４のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖、または
配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖
を有する、〔１〕～〔５〕のいずれかに記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体。
〔７〕〔１〕～〔６〕のいずれかに記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸。
〔８〕〔７〕に記載の核酸を含有するベクター。
〔９〕〔８〕に記載のベクターを含有する形質転換体。
〔１０〕〔１〕～〔６〕のいずれか１項に記載のヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体またはその抗原結合断片を含む、自然リンパ球（ＩＬＣ）の活性化抑制剤。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体を提供することができる。また、自然リンパ球（ＩＬＣ）の活性化抑制剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
図１は、ｍＡＫＢ１のヒトＤＮＡＭ－１との結合性を解析した結果を示す。
図２は、ｍＡＫＢ１とそのヒト化抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。復帰変異したアミノ酸残基を太字で、ＣＤＲを下線で示す。
図３は、ｍＡＫＢ１とそのヒト化抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。復帰変異したアミノ酸残基を太字で、ＣＤＲを下線で示す。
図４は、ｈＡＫＢ１－Ａ、ｈＡＫＢ１－Ｂ、ｈＡＫＢ１－Ｃ、およびｈＡＫＢ１－ＤのヒトＤＮＡＭ－１との結合性を解析した結果を示す。
図５は、ｈＡＫＢ１－ＡおよびｈＡＫＢ１－ＢのヒトＤＮＡＭ－１との結合性を解析した結果を示す。
図６は、ｈＡＫＢ１－Ａの重鎖コーディング領域の塩基配列を示す。
図７は、ｈＡＫＢ１－Ｂの重鎖コーディング領域の塩基配列を示す。
図８は、ｈＡＫＢ１－ＡおよびｈＡＫＢ１－Ｂの軽鎖コーディング領域の塩基配列を示す。
図９は、ｈＡＫＢ１－Ａの重鎖、ｈＡＫＢ１－Ｂの重鎖、ならびにｈＡＫＢ１－ＡおよびｈＡＫＢ１－Ｂの軽鎖のアミノ酸配列を示す。
図１０は、ｈＴＫＢ１重鎖コーディング領域の塩基配列を示す。
図１１は、ｈＴＫＢ１軽鎖コーディング領域の塩基配列を示す。
図１２は、ｈＴＫＢ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を示す。
図１３Ａは、肺の自然リンパ球（ＩＬＣ）におけるＤＮＡＭ－１の発現を検討した結果を示す。
図１３Ｂは、小腸の自然リンパ球（ＩＬＣ）におけるＤＮＡＭ－１の発現を検討した結果を示す。
図１４は、野生型マウスおよびＤＮＡＭ－１遺伝子欠損マウスを用いて、ＩＬＣにおけるサイトカインの発現量を解析した結果を示す。
図１５は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の自然リンパ球（ＩＬＣ）におけるＤＮＡＭ－１の発現を検討した結果を示す図である。
図１６は、自然リンパ球（ＩＬＣ）におけるサイトカイン産生にｍＡＫＢ１、ｈＡＫＢ１－Ａ、ｈＡＫＢ１－Ｂ、およびｈＴＫＢ１が与える影響を検討した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
次に本発明について具体的に説明する。
[ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体]
ヒト化抗ＤＮＡＭ－１抗体とは、ヒトＤＮＡＭ－１を特異的に認識する、ヒト化抗体の意味で用いる。特異的に認識するとは、ヒトＤＮＡＭ－１タンパク質には結合するが、ヒトＤＮＡＭ－１タンパク質以外には結合しないことを意味する。前記結合活性は、公知の方法、例えば免疫沈降法、ウェスタンブロッティング、ＥＩＡ（ｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）、ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）、フローサイトメトリー、プルダウンアッセイ等の方法により測定することができる。
【００１０】
ヒト化抗体とは、可変領域が原則、ヒト以外の抗体由来の相補決定領域（ＣＤＲ）とヒト抗体由来のフレームワーク領域（ＦＲ）とからなり、定常領域がヒト抗体由来の定常領域からなる抗体である。
（【００１１】以降は省略されています）

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