特許ウォッチ

公開番号2025126922
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-29
出願番号2025077259,2022531084
出願日2025-05-07,2020-07-27
発明の名称細胞の標的化および標識化に使用する抗CD3アプタマー
出願人イグザカフランス
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/115 20100101AFI20250822BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】送達ビヒクルのための標的化部分として、または免疫療法、免疫診断、対象におけるCD3+T細胞の単離、精製、または特徴付けするための分子成分として使用することができる、細胞表面上のCD3タンパク質複合体を認識する高親和性アプタマーを提供する。
【解決手段】特定のヌクレオチド配列を有するCD3ε/γまたはCD3ε/δに結合するアプタマーが提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
配列ＧＸ
１
Ｘ
２
ＴＸ
３
ＧＸ
４
Ｘ
５
Ｘ
６
Ｘ
７
Ｘ
８
Ｘ
９
ＧＧＸ
１０
ＣＴＧＧを含むアプタマーであって、ここで、Ｘ
１
はＧまたはＡ；Ｘ
２
およびＸ
６
はＡ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ
３
はＴまたはＧであり、Ｘ
４
およびＸ
９
はＧまたはＣであり、Ｘ
５
はＣまたはＴであり、Ｘ
７
はＴ、Ｇ、またはＣであり、Ｘ
８
およびＸ
１０
はＣ、Ｔ、またはＡ（配列番号１０９）またはその変異体であり、前記アプタマーはＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
続きを表示（約 1,400 文字）【請求項２】
配列ＧＧＧＸ
１
ＴＴＧＧＣＸ
２
Ｘ
３
Ｘ
４
ＧＧＧＸ
５
ＣＴＧＧＣを含むアプタマーであって、Ｘ
１
およびＸ
２
はＡ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ
３
はＴ、Ｃ、またはＧであり、Ｘ
４
およびＸ
５
はＡ、Ｔ、またはＣ（配列番号１１０）またはその変異体であり、前記アプタマーはＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
【請求項３】
配列ＧＸ
１
ＴＴＸ
２
ＧＸ
３
Ｘ
４
Ｘ
５
Ｘ
６
ＣＸ
７
ＧＧＸ
８
ＣＴＧＧＸ
９
Ｇを含むアプタマーであって、Ｘ
１
はＡまたはＧであり、Ｘ
２
はＴまたはＧであり、Ｘ
３
およびＸ
７
、Ｘ
９
はＧまたはＣであり、Ｘ
４
はＴまたはＣであり、Ｘ
５
はＡまたはＴであり、Ｘ
６
はＴ、Ｃ、またはＧであり、Ｘ
８
はＡまたはＣ（配列番号１１１）またはその変異体であり、前記アプタマーがＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
【請求項４】
配列ＧＧＧＴＴＴＧＧＣＡＸ
１
ＣＧＧＧＣＣＴＧＧＣを含むアプタマーであって、ここで、Ｘ
１
はＧ、Ｃ、またはＴ（配列番号：１１２）またはその変異体であり、前記アプタマーがＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
【請求項５】
配列ＧＣＡＧＣＧＡＵＵＣＵＸ
１
ＧＵＵＵを含むアプタマーであって、Ｘ
１
はＵまたは塩基なく（配列番号：１１３）またはその変異体であり、前記アプタマーがＣＤ３ε/γ
またはＣＤ３ε/δに結合する。
【請求項６】
前記アプタマーが、約０．２ｐＭ～約２５０ｎＭの解離定数でヒトＣＤ３ε/γおよび
／またはＣＤ３ε/δに結合する、請求項１～５のいずれかに記載のアプタマー。
【請求項７】
前記アプタマーが、約２０ｎＭ～約８００ｎＭの解離定数で、非ヒト型のＣＤ３ε/γ
および／またはＣＤ３ε/δに結合する、請求項１～５のいずれかに記載のアプタマー。
【請求項８】
配列番号１～１０８から選択される配列を含む、請求項１～７のいずれかに記載のアプタマー
【請求項９】
前記配列の変異体を含む、請求項１～８のいずれかに記載のアプタマーであって、前記塩基のうちの１つ以上が非天然に存在する塩基で置換されているか、または前記塩基のうちの１つ以上が省略されているか、または対応するヌクレオチドがリンカーで置換されている、前記アプタマー。
【請求項１０】
前記非天然に存在する１以上の塩基が、メチルイノシン、ジヒドロウリジン、メチルグアノシン、およびチオウリジンからなる群から選択される、請求項９に記載のアプタマー。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ３に結合し、Ｔ細胞の標的化、標識化、または選別に使用できるＤＮＡおよびＲＮＡアプタマーに関する。
関連出願の相互参照
この出願は、２０１９年７月２６日に出願された米国仮出願第６２／８７９，４０１号および２０１９年７月２６日に出願された米国仮出願第６２／８７９，４１３号、および２０１９年７月２６日に出願されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＩＢ２０１９／０００８９０に対して優先権を主張する。前述の各出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込
まれる。
続きを表示（約 3,200 文字）【背景技術】
【０００２】
表面抗原群３（ＣＤ３）は、１つのγサブユニット、１つのδサブユニット、および２つのεサブユニットを含有するタンパク質複合体であり、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と会合し、ＴＣＲがペプチド－ＭＨＣ複合体に結合するとき、細胞内シグナルを伝達するＣＤ３γεおよびＣＤ３δεヘテロダイマーを形成する。ＣＤ３サブユニットは高度に同種であり、それぞれが小さな細胞質ドメインと負に帯電した残基を含有する膜貫通ドメインを持ち、それを介してＴＣＲの膜貫通領域の正に帯電した残基と会合する。ＴＣＲはα、β、ζ、およびηサブユニットを含み、ζζホモ二量体またはζηヘテロ二量体と会合するαβヘテロ二量体として存在する。次に、ＴＣＲはＣＤ３γεおよびＣＤ３δεヘテロ二量体と会合する。
【０００３】
アプタマーは、独特の三次元立体配置を持つ短い一本鎖オリゴヌクレオチドである。抗体のように、アプタマーは高い特異性で標的に結合し、しばしば標的の生物学的活性を調節することができる。アプタマーは、免疫原性の欠如、十分に制御された安価な化学合成、高い安定性、良好な組織浸透など、抗体に比べて多くの利点を提供する。アプタマーはまた、標的化部分として使用するために、ナノ粒子、薬物、造影剤、および他の核酸に結合させることができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
免疫原性の欠如、十分に制御された安価な化学合成、高い安定性、良好な組織浸透など、抗体に欠如している特性が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本技術は、ＣＤ３に結合し、Ｔ細胞の標的化、標識化、または選別に使用できるＤＮＡおよびＲＮＡアプタマーを提供する。
したがって、一側面においては、この技術は、ＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δタンパク質複合体に結合するアプタマーを提供する。アプタマーは、本明細書に記載のいくつかの核酸配列のいずれかを有するポリヌクレオチドを含む。
【０００６】
本発明の別の側面は、ＣＤ３を発現する細胞を標識化、精製、または選別する方法である。細胞は、蛍光標識や放射性同位元素などの標識を持つ抗ＣＤ３アプタマーと培養される。
この技術の別の側面は、上記の抗ＣＤ３アプタマーを含むインビトロまたはインビボ標的化Ｔ細胞のための送達ビヒクルである。
技術のさらに別の側面は、送達ビヒクルを対象のＴ細胞に標的化する方法である。この方法は、送達ビヒクルを対象に投与することを含む。
さらに、この技術は、上記の薬物送達ビヒクルを含む医薬組成物を提供する。
【０００７】
本件技術は、以下の特徴のリストにさらに要約することができる。
１．配列ＧＸ
１
Ｘ
２
ＴＸ
３
ＧＸ
４
Ｘ
５
Ｘ
６
Ｘ
７
Ｘ
８
Ｘ
９
ＧＧＸ
１０
ＣＴＧＧを含むアプタマーであって、ここで、Ｘ
１
はＧまたはＡ；Ｘ
２
およびＸ
６
はＡ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ
３
はＴまたはＧであり、Ｘ
４
およびＸ
９
はＧまたはＣであり、Ｘ
５
はＣまたはＴであり、Ｘ
７
はＴ、Ｇ、またはＣであり、Ｘ
８
およびＸ
１０
はＣ、Ｔ、またはＡ（配列番号：１０９）またはその変異体であり、前記アプタマーはＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
２．配列ＧＧＧＸ
１
ＴＴＧＧＣＸ
２
Ｘ
３
Ｘ
４
ＧＧＧＸ
５
ＣＴＧＧＣを含むアプタマーであって、Ｘ
１
およびＸ
２
はＡ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ
３
はＴ、Ｃ、またはＧであり、Ｘ
４
およびＸ
５
はＡ、Ｔ、またはＣ（配列番号：１１０）またはその変異体であり、前記アプタマーはＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
配列ＧＸ
１
ＴＴＸ
２
ＧＸ
３
Ｘ
４
Ｘ
５
Ｘ
６
ＣＸ
７
ＧＧＸ
８
ＣＴＧＧＸ
９
Ｇを含むアプタマーであって、Ｘ
１
はＡまたはＧ、Ｘ
２
はＴまたはＧ、Ｘ
３
およびＸ
７
、Ｘ
９
はＧまたはＣであり、Ｘ
４
はＴまたはＣであり、Ｘ
５
はＡまたはＴであり、Ｘ
６
【０００８】
４．配列ＧＧＧＴＴＴＧＧＣＡＸ
１
ＣＧＧＧＣＣＴＧＧＣを含むアプタマーであって、ここで、Ｘ
１
はＧ、Ｃ、またはＴ（配列番号：１１２）またはその変異体であり、前記アプタマーがＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
５．配列ＧＣＡＧＣＧＡＵＵＣＵＸ
１
ＧＵＵＵを含むアプタマーであって、Ｘ
１
はＵまたは塩基でなく（配列番号：１１３）またはその変異体であり、前記アプタマーがＣＤ３ε/γまたはＣＤ３ε/δに結合する。
６．前記アプタマーが、約０．２ｐＭ～約２５０ｎＭの解離定数でヒトＣＤ３ε/γおよ
び／またはＣＤ３ε/δに結合する、特徴１～５のいずれかに記載に記載のアプタマー。
７．前記アプタマーが、約２０ｎＭ～約８００ｎＭの解離定数で、非ヒト型のＣＤ３ε/
γおよび／またはＣＤ３ε/δに結合する、特徴１～５のいずれかに記載のアプタマー。
【０００９】
８．配列番号１～１０８から選択される配列を含む、特徴１～７のいずれかに記載のアプタマー。
９．前記塩基の１つ以上が自然に生成しない塩基で置換されているか、または前記塩基のうちの１つ以上が省略されているか、または対応するヌクレオチドがリンカーで置換されている、前記配列の変異体を含む特徴１～８のいずれかに記載のアプタマー。
１０．前記自然に生成しない塩基の１以上が、メチルイノシン、ジヒドロウリジン、メチルグアノシン、およびチオウリジンからなる群から選択される、特徴９のアプタマー。
１１．ＣＤ３＋Ｔ細胞に結合するがそれらを活性化しない特徴１～１０のいずれかに記載のアプタマー。
【００１０】
１２．薬剤、染料、共有結合のための官能基または生物学的に活性な薬剤をＴ細胞に送達するためのビヒクルであって、前記ビヒクルは、特徴１～１０のいずれかに記載のアプタマーを含む。
１３．高分子ナノ粒子を含む、特徴１１または特徴１２に記載のビヒクル。
１４．高分子ナノ粒子がポリ（ベータアミノエステル）（ＰＢＡＥ）を含む、特徴１３に記載のビヒクル。
１５．アプタマーが前記ポリマーに共有結合している、特徴１３または特徴１４に記載のビヒクル。
１６．薬剤がＴ細胞モジュレーターまたは造影剤である、特徴１３～１５のいずれかに記載のビヒクル。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許