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公開番号2025136337
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-19
出願番号2024034831
出願日2024-03-07
発明の名称肝細胞様細胞の製造方法及びその利用
出願人国立大学法人徳島大学
代理人弁理士法人三枝国際特許事務所
主分類C12N 5/071 20100101AFI20250911BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】肝細胞様細胞の製造方法等の提供。
【解決手段】肝芽細胞を肝細胞様細胞に分化させる工程を含む、肝細胞様細胞の製造方法であって、
当該工程において、肝芽細胞に緑色LEDを照射することを含む、方法。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
肝芽細胞を肝細胞様細胞に分化させる工程を含む、肝細胞様細胞の製造方法であって、
当該工程において、肝芽細胞に緑色ＬＥＤを照射することを含む、方法。
続きを表示（約 660 文字）【請求項２】
緑色ＬＥＤのピーク波長が、５００～５７０ｎｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
緑色ＬＥＤの照射条件として、
１日当たりの積算照度が、０．３～０．９Ｊ／ｃｍ
２
、
エネルギー密度が、８～４０Ｗ／ｍ
２
、
１日当たりの照射時間が、１～１０分間、及び／又は
照射日数が５～１５日間である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
さらに、幹細胞を肝芽細胞に分化させる工程を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
さらに、
幹細胞を内胚葉細胞に分化させる工程、及び
内胚葉細胞を肝芽細胞に分化させる工程を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法により製造された肝細胞様細胞。
【請求項７】
緑色ＬＥＤを照射されずに肝芽細胞から分化した肝細胞様細胞と比較して、
以下の（Ａ）～（Ｃ）の少なくとも１つを満たす、肝細胞様細胞。
（Ａ）α－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）遺伝子の発現量が１．１倍以上である
（Ｂ）オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）遺伝子の発現量が１．３倍以上である
（Ｃ）塩化アンモニウム添加後２４時間の細胞培養上清中のアンモニウムイオン濃度が、０．８倍以下である
【請求項８】
請求項６又は７に記載の肝細胞様細胞を含む、製剤。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、肝細胞様細胞の製造方法及びその応用技術等に関する。詳細には、肝芽細胞を肝細胞様細胞に分化させる工程において、肝芽細胞に緑色ＬＥＤを照射することを含む、肝細胞様細胞の製造方法及びその応用技術等に関する。
続きを表示（約 2,000 文字）【背景技術】
【０００２】
重篤な肝疾患に対する治療方法としては、肝移植が一般的であるが、特に日本においては、ドナー不足の問題があることから、肝移植に代えて、細胞治療（細胞移植）の重要性が高まっている。
【０００３】
これまでに、間葉系幹細胞を肝障害モデルマウスに移植する検討が行われているが、肝細胞への分化が不十分等といった課題が残されている。
また、幹細胞から肝細胞様細胞への分化誘導も、近年全世界中で行われているが、分化誘導された肝細胞様細胞の機能は、実際の肝細胞と比較して劣っていることが報告されており、これまでに物質添加又は遺伝子操作等による肝細胞様細胞の機能向上方法の開発が進められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
特許第７０７８９３９号公報
【非特許文献】
【０００５】
Surg Today 2021 Mar;51(3):340-349.
J Hepatobiliary Pancreat Sci. 2021 Sep;28(9):705-715.
Hepatol Res 2018 Oct;48(11):926-936.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本開示は、肝細胞様細胞の製造方法等を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、肝芽細胞を肝細胞様細胞に分化させる工程において、肝芽細胞に緑色ＬＥＤを照射することにより、肝細胞様細胞の機能が向上することを見出し、さらに改良を重ねた。
【０００８】
本開示は、例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
肝芽細胞を肝細胞様細胞に分化させる工程を含む、肝細胞様細胞の製造方法であって、
当該工程において、肝芽細胞に緑色ＬＥＤを照射することを含む、方法。
項２．
緑色ＬＥＤのピーク波長が、５００～５７０ｎｍである、項１に記載の方法。
項３．
緑色ＬＥＤの照射条件として、
１日当たりの積算照度が、０．３～０．９Ｊ／ｃｍ
２
、
エネルギー密度が、８～４０Ｗ／ｍ
２
、
１日当たりの照射時間が、１～１０分間、及び／又は
照射日数が５～１５間である、項１又は２に記載の方法。
項４．
さらに、幹細胞を肝芽細胞に分化させる工程を含む、項１～３のいずれか１項に記載の方法。
項５．
さらに、
幹細胞を内胚葉細胞に分化させる工程、及び
内胚葉細胞を肝芽細胞に分化させる工程を含む、項１～３のいずれか１項に記載の方法。
項６．
項１～５のいずれか１項に記載の方法により製造された肝細胞様細胞。
項７．
緑色ＬＥＤを照射されずに肝芽細胞から分化した肝細胞様細胞と比較して、
以下の（Ａ）～（Ｃ）の少なくとも１つを満たす、肝細胞様細胞。
（Ａ）α－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）遺伝子の発現量が１．１倍以上である
（Ｂ）オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）遺伝子の発現量が１．３倍以上である
（Ｃ）塩化アンモニウム添加後２４時間の細胞培養上清中のアンモニウムイオン濃度が、０．８倍以下である
項８．
項６又は７に記載の肝細胞様細胞を含む、製剤。
【発明の効果】
【０００９】
機能が向上した肝細胞様細胞の製造方法が提供される。また、機能が向上した肝細胞様細胞及び当該細胞を含む製剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
緑色ＬＥＤ照射プロトコルの概略図を示す。
細胞の顕微鏡写真及び細胞生存率の測定結果を示す。
肝細胞成熟マーカーであるアルブミン（ＡＬＢ）及びα－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）の発現量を測定した結果を示す。
アンモニア代謝に関与する尿素サイクル遺伝子であるオルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）及びカルバミルリン酸合成酵素１（ＣＰＳ１）の発現量を測定した結果を示す。
アンモニア代謝及びＣＹＰ３Ａ４活性の測定結果を示す。
ＲＯＳ（活性酸素種）活性の測定結果を示す。
ＰＧＣ１αの発現量を測定した結果、並びにＣａ
２＋
及びＡＴＰアッセイの結果を示す。
光受容体であるＯＰＮ３の発現量を測定した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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