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公開番号2025026540
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-21
出願番号2024212073,2023161498
出願日2024-12-05,2017-03-03
発明の名称大豆アレルギーの抗原
出願人学校法人藤田学園,ホーユー株式会社
代理人個人,個人,個人,個人
主分類G01N 33/53 20060101AFI20250214BHJP(測定;試験)
要約【課題】
本発明は、大豆に対するアレルギーの新規抗原、大豆に対するアレルギーの診断方法および診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、当該抗原が除去された大豆または大豆加工品、ならびに対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスターを提供する。
【解決手段】
本発明の診断キット等は、(1)～(8)として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、または(1α)～(55α)として特定されるタンパク質の少なくとも一つを含む。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
大豆アレルギーの診断キットであって、以下（１）～（８）のタンパク質の少なくとも一つ：
（１）（１Ａ）ボウマン－バークタイププロテイナーゼインヒビターＤ－ＩＩ（Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II）又はその変異体であって、以下の（１Ａ-ａ）～
（１Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１Ａ-ａ）配列番号２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加さ
れたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｂ）配列番号２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列
を含むタンパク質；
（１Ａ-ｃ）配列番号１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付
加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｄ）配列番号１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコ
ードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１Ａ-ｅ）配列番号１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１Ｂ）配列番号１７～２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２）（２Ａ）リブロースビスホスフェートカルボキシラーゼラージチェイン（Ribulose
bisphosphate carboxylase large chain）又はその変異体であって、以下の（２Ａ-ａ）～（２Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２Ａ-ａ）配列番号４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加さ
れたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ-ｂ）配列番号４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列
を含むタンパク質；
（２Ａ-ｃ）配列番号３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付
加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ-ｄ）配列番号３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコ
ードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２Ａ-ｅ）配列番号３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２Ｂ）配列番号２１～２８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３）（３Ａ）γ－グルタミルヒドロラーゼ（Gamma-glutamyl hydrolase）又はその変異体であって、以下の（３Ａ-ａ）～（３Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３Ａ-ａ）配列番号６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加さ
れたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ-ｂ）配列番号６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列
を含むタンパク質；
（３Ａ-ｃ）配列番号５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付
加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ-ｄ）配列番号５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコ
ードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３Ａ-ｅ）配列番号５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３Ｂ）配列番号２９又は３０で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４）（４Ａ）グアニンヌクレオチドバインディングプロテインサブユニットベータライクプロテイン（Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein）又はその変異体であって、以下の（４Ａ-ａ）～（４Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４Ａ-ａ）配列番号８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加さ
れたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ-ｂ）配列番号８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列
を含むタンパク質；
（４Ａ-ｃ）配列番号７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付
加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ-ｄ）配列番号７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコ
ードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４Ａ-ｅ）配列番号７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
続きを表示（約 4,400 文字）【請求項２】
大豆アレルギーの診断キットであって、以下（１α）～（５５α）のタンパク質の少なくとも一つ：
（１α）（１αＡ１）endoplasmin homolog isoform X2又はその変異体であって、以下の（１αＡ１－ａ）～（１αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１αＡ１－ａ）配列番号７０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ１－ｂ）配列番号７０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ１－ｃ）配列番号６９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ１－ｄ）配列番号６９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１αＡ１－ｅ）配列番号６９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＢ１）配列番号７１～８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１αＡ２）endoplasmin homolog isoform X2又はその変異体であって、以下の（１αＡ２－ａ）～（１αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１αＡ２－ａ）配列番号８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ２－ｂ）配列番号８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミ
ノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ２－ｃ）配列番号８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ２－ｄ）配列番号８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１αＡ２－ｅ）配列番号８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１αＢ２）配列番号９０～１０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２α）（２αＡ１）heat shock cognate protein 80又はその変異体であって、以下の
（２αＡ１－ａ）～（２αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２αＡ１－ａ）配列番号１０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ１－ｂ）配列番号１０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ１－ｃ）配列番号１０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ１－ｄ）配列番号１０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２αＡ１－ｅ）配列番号１０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＢ１）配列番号１０７～１２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２αＡ２）heat shock protein 90-1又はその変異体であって、以下の（２αＡ２－
ａ）～（２αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２αＡ２－ａ）配列番号１２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ２－ｂ）配列番号１２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ２－ｃ）配列番号１２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ２－ｄ）配列番号１２１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２αＡ２－ｅ）配列番号１２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２αＢ２）配列番号１２３～１３７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２αＡ３）hypothetical protein GLYMA_02G302500又はその変異体であって、以下の（２αＡ３－ａ）～（２αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２αＡ３－ａ）配列番号１３９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ３－ｂ）配列番号１３９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ３－ｃ）配列番号１３８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ３－ｄ）配列番号１３８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２αＡ３－ｅ）配列番号１３８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２αＢ３）配列番号１４０～１５３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４α）（４αＡ）embryo-specific urease isoform X1又はその変異体であって、以下
の（４αＡ－ａ）～（４αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４αＡ－ａ）配列番号１５５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４αＡ－ｂ）配列番号１５５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４αＡ－ｃ）配列番号１５４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４αＡ－ｄ）配列番号１５４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４αＡ－ｅ）配列番号１５４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４αＢ）配列番号１５６および１５７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５α）（５αＡ）alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic/amyloplastic又はその変異体であって、以下の（５αＡ－ａ）～（５αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５αＡ－ａ）配列番号１５９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５αＡ－ｂ）配列番号１５９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
【請求項３】
大豆アレルギーの診断用組成物であって、請求項１において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、または請求項２において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、を抗原として含む、前記診断用組成物。
【請求項４】
対象の大豆アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、請求項１において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、または請求項２において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、である、前記方法。
【請求項５】
請求項１において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、または請求項２において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、を含む医薬組成物。
【請求項６】
大豆アレルギーを治療するための、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
抗原が除去又は低減されていることを特徴とする大豆又は大豆加工品であって、当該抗原は請求項１において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、または請求項２において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、である、前記大豆または大豆加工品。
【請求項８】
請求項１において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、または請求項２において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、と結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスター。
【請求項９】
大豆由来の抗原であって、請求項１において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つまたは請求項２において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つであり、そして大豆に対するアレルギーの原因となる、前記抗原。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、大豆に対するアレルギーの新規抗原に関する。本発明はまた、大豆に対するアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法に関する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、及び当該抗原が除去又は低減された大豆又は大豆加工品に関する。本発明はさらに、対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスターに関する。
続きを表示（約 1,600 文字）【背景技術】
【０００２】
アレルギー患者の血清及び組織中では、特定の抗原に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。このＩｇＥ抗体と特定の抗原の相互作用により生じた生理学的結果によりアレルギー反応が惹起される。
【０００３】
従来のアレルギー検査薬においては、単にアレルゲン候補の食品・材料等をすりつぶして抗原試薬を作成していることが多い（特許文献１）。このように従来の抗原試薬は、必ずしもアレルギー反応を引き起こす特定の抗原タンパク質（アレルゲンコンポーネント）を単独で含有するものではなく、複数のタンパク質成分を含むものである。したがって、従来の抗原試薬においては、アレルゲンコンポーネントごとに含有量が異なっていた。このため、従来の抗原試薬中に含まれる多数のタンパク質の中で、ＩｇＥ抗体との結合について陽性反応が判定可能な閾値を超える含有量のタンパク質がアレルゲンコンポーネントであった場合にのみ、アレルギー検査における陽性反応を検出することが可能であった。逆に、食品等のアレルゲン中の含有量が少ないアレルゲンコンポーネントにＩｇＥ抗体が結びつく患者については、従来のアレルギー検査薬を用いても陽性反応が判定できず、診断効率は十分に高いとはいえない状態であった。
【０００４】
また、アレルギー反応の症状や重篤度は、アレルゲンコンポーネントの含有量とは必ずしも相関しない。アレルゲン候補の食品・材料中に微量に含まれるアレルゲンコンポーネントに患者のＩｇＥ抗体が反応する場合であってもアレルギー症状が現れたり、重篤度に関与したりする場合がある。
【０００５】
粗抗原を構成する一つ一つのコンポーネントに対するＩｇＥ抗体を調べることにより、診断に直結する感作と汎アレルゲン等による交差抗原性に基づく感作を区別して診断効率を上げる試みも進められている。大豆アレルゲンに関しては、現在、８つが世界保健機関／国際免疫連合（WHO/IUIS）に登録されている。
【０００６】
しかしながら、アレルギー検査の信頼度を高めるためには、アレルゲン候補の食品・材料において、アレルゲンコンポーネントを網羅的に特定する必要があるところ、上記アレルゲンコンポーネントの測定による患者検出率はまだまだ不十分である。大豆の新規アレルゲンを同定することは、診断薬の精度を高めるだけでなく、低アレルゲン食品や治療薬のターゲットとしても非常に重要である。
【０００７】
一方、タンパク質の分離・精製に関しては、従来、細胞抽出物などからタンパク質や核酸を分離・精製する方法が種々に検討されてきている。塩濃度を利用した透析、遠心分離などはその一例であるといえる。
【０００８】
また、タンパク質や核酸の残基が有する電荷や、分子量の違いを利用した精製方法も多数検討されている。電荷を利用した精製方法としては、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーや等電点電気泳動を例示できる。分子量の違いを利用した精製方法としては遠心分離、分子量ふるいによるカラムクロマトグラフィーやＳＤＳ－ＰＡＧＥ(ドデ
シル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を例示できる。
【０００９】
近年、少量のサンプルから多様なタンパク質を分離精製する方法として、１次元目に等電点電気泳動を行い、２次元目にＳＤＳ－ＰＡＧＥを行う２次元電気泳動法が用いられている。出願人らはこれまでに、分離能が高い２次元電気泳動法を開発してきた（特許文献２～５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
特開２００２－２８６７１６
特開２０１１－３３５４４
特開２０１１－３３５４６
特開２０１１－３３５４７
特開２０１１－３３５４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
（【００１１】以降は省略されています）

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