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公開番号2025143366
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-01
出願番号2025111302,2021561399
出願日2025-07-01,2020-11-24
発明の名称T細胞マスターセルバンク
出願人国立大学法人京都大学,武田薬品工業株式会社
代理人個人,個人
主分類C12N 5/0783 20100101AFI20250924BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】T細胞マスターセルバンクおよび/またはT細胞ワーキングセルバンクを含む、T細胞製品の提供システムを提供する。
【解決手段】T細胞を複数の保存容器(無菌バイアルなど)に分注し、凍結させてストックすることでT細胞マスターセルバンクを構築することができる。このT細胞マスターセルバンク中の一容器分のT細胞を融解し、適宜特性解析の試験に供することができる。また、同一の容器からまたは別の融解した一容器からT細胞を複数の適切な容器に分注し、凍結してストックすることでT細胞ワーキングセルバンクを構築することができる。T細胞セルバンクの一または複数容器分のT細胞を融解し、T細胞に外因性遺伝子を含む核酸を導入し、拡大培養することによってT細胞製品を製造することができる。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを含む、T細胞製品の提供システム。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、T細胞マスターセルバンクおよびT細胞ワーキングセルバンク、ならびに該バンクを含むT細胞製品の提供システムなどに関する。
続きを表示（約 5,800 文字）【０００２】
（発明の背景）
近年、がんに対する治療法として免疫細胞治療が注目されている。免疫細胞治療とは、患者の体外で増殖および活性化させた免疫細胞を患者に投与し、その免疫細胞にがん細胞を攻撃させる治療法である。免疫細胞治療は、従来の外科治療、放射線治療、化学治療の三大療法に比べて副作用がほとんどないという利点を有している。免疫細胞治療には様々な種類の治療法があるが、その中でも、off-the-shelfの同種異系の（Allogenic）T細胞製品に期待が寄せられている。
【０００３】
上記同種異系のT細胞製品を提供するシステムとして、iPS細胞のバンキング技術（例えば、特許文献１など）やiPS細胞へのCAR遺伝子の導入技術（例えば、特許文献２など）を利用して、あらかじめiPS細胞にCAR遺伝子を導入して作製したiPS細胞を拡大培養した後、該細胞をストックすることでCAR遺伝子を有するiPS細胞のマスターセルバンクを構築し、該セルバンク由来のiPS細胞をT細胞に分化させることで得たT細胞を、同種異系のT細胞製品として用いるシステムが報告されている（例えば、非特許文献１）。
【０００４】
上記システムでは、iPS細胞のような多能性幹細胞にCAR遺伝子などの外因性の遺伝子を導入し、該細胞をT細胞へと分化させるプロセスが必要となる。そのため、各国当局の定めるGMP(Good Manufacturing Practice)基準を満たしながら当該プロセス中の各段階における細胞（例えば、iPS細胞、T細胞、CAR-T細胞）の維持管理工程、分化工程および培養工程を行うことが必要となる。例えば、iPS細胞のマスターセルバンクを用いていることから、T細胞製品を調製するためにはiPS細胞をT細胞に分化させる必要があるが、iPS細胞は多分化能を有することから、ロット毎に均一な分化細胞を誘導するために毎回高いレベルでの工程・品質管理が求められ、人的、時間的および金銭的コストが極めて高い。かかるコストが、T細胞製品の安定的な提供に甚大な影響を与えている。特に複数種類のT細胞製品を提供しようとする場合には、それぞれのコストや時間が累積されることとなり、その影響はより深刻なものとなる。従って、GMP基準を満たしながらもコストを抑えた製品を供給するためのシステム、さらには、複数種類のT細胞製品を用いた場合でも、高品質で低コストに該製品を提供できるシステムが望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
米国公開第2009-0299763号
国際公開第2017/088012号
【非特許文献】
【０００６】
Bob Valamehr (Vice President of Fate Therapeutics) “Generation of off-the-shelf TCR-less CAR T cells from renewable pluripotent cells”, April 14-18, 2018 (AACR Annual Meeting 2018 Press Program)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って本発明は、人的、時間的および金銭的コストを低減でき、かつロット間差が小さく高品質なoff-the-shelfの同種異系の（Allogenic）T細胞製品の提供システムを提供することを課題とする。また、前記システムの提供に用いることができるT細胞マスターセルバンクおよびT細胞ワーキングセルバンク、ならびにこれらのコレクションを提供することも課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、非特許文献１などの記載の従来の技術では、もっぱらiPS細胞のマスターセルバンクの構築方法に着目しているが、これは、T細胞と比較してiPS細胞は増殖能に優れているためであると推測した。そこで、T細胞を拡大培養により十分に増殖できれば、T細胞または該増殖させたT細胞をマスターセルバンクとして用いることができるのではないかとの着想を得た。即ち、本発明者らは、CAR遺伝子などの外因性の遺伝子を有するiPS細胞のマスターセルバンクを構築するのではなく、該外因性の遺伝子を含むT細胞のマスターセルバンクを構築することで、該セルバンクから高品質なT細胞製品を迅速に提供することができるのではないかとの着想を得た。本発明者らが知る限りにおいて、T細胞のマスターセルバンクを構築するという発想は全く知られていない全く新規なものであった。本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下を提供する。
［１］T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを含む、T細胞製品の提供システム。
［２］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクが人工多能性幹細胞由来のT細胞を含む、［１］に記載のシステム。
［３］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクが、少なくとも1種類のHLA遺伝子の発現が抑制されたT細胞を含む、［１］または［２］に記載のシステム。
［３ａ］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクが、外因性遺伝子が導入されたT細胞を含む、［１］～［３］のいずれか１つに記載のシステム。
［３ｂ］さらに、T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを収集して、2種類以上のT細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを含むT細胞マスターセルバンクコレクションおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクコレクションを構築するステップを含む、［１］～［３ａ］のいずれか１つに記載のシステム。
［３ｃ］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクの種類が2種類以上である、［１］～［３ｂ］のいずれか１つに記載のシステム。
［３ｄ］さらに、T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを選択するステップを含む、［１］～［３ｃ］のいずれか１つに記載のシステム。
［４］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクから準備したT細胞に、外因性遺伝子を含む核酸を導入するステップを含む、［１］～［３ｄ］のいずれか１つに記載のシステム。
［５］前記外因性遺伝子がCAR遺伝子又は外因性のTCR遺伝子である、［４］に記載のシステム。
［６］前記T細胞製品の種類が2種類以上である、［１］～［５］のいずれか１つに記載のシステム。
［６ａ］さらにT細胞製品を選択するステップを含む、［１］～［６］のいずれか１つに記載のシステム。
［７］さらに、前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクから準備したT細胞を拡大培養するステップを含む、［１］～［６ａ］のいずれか１つに記載のシステム。
［８］前記T細胞を拡大培養するステップが、CD30アゴニストによって該細胞を刺激する工程を含む、［７］に記載のシステム。
［８ａ］前記T細胞を拡大培養するステップにおいて、CD30アゴニストの存在下で該細胞を培養する工程を含む、［７］に記載のシステム。
［９］さらに、前記拡大培養されたT細胞を含む凍結T細胞製品を製造するステップを含む、［７］～［８ａ］のいずれか１つに記載のシステム。
［１０］さらに、T細胞製品を収集して、2種類以上のT細胞製品を含むT細胞製品コレクションを構築するステップを含む、［６］～［９］のいずれか１つに記載のシステム。
［１０ａ］さらに、被験者の情報を取得するステップを含む、［１］～［１０］のいずれか１つに記載のシステム。
［１０ｂ］さらに、被験者の情報に基づいて、適切なT細胞マスターセルバンクおよび／または適切なT細胞ワーキングセルバンクを選択するステップを含む、［１０ａ］に記載のシステム。
［１０ｃ］さらに、被験者の情報に基づいて、適切なT細胞製品を選択するステップを含む、［１０ａ］に記載のシステム。
［１１］さらに、被験者の腫瘍に発現している腫瘍特異的抗原又は腫瘍関連抗原を同定するステップを含む、［１］～［１０ｃ］のいずれか１つに記載のシステム。
［１２］さらに、同定された抗原を認識し結合するCAR又は外因性のTCRを発現するT細胞製品を、２種類以上のT細胞製品を含むT細胞製品コレクションから選択するステップを含む、［１１］に記載のシステム。
［１３］T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを構築する工程を含む、T細胞製品の製造方法。
［１４］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクが人工多能性幹細胞由来のT細胞を含む、［１３］に記載のT細胞製品の製造方法。
［１５］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクが、少なくとも1種類のHLA遺伝子の発現が抑制されたT細胞を含む、［１３］または［１４］に記載のT細胞製品の製造方法。
［１５ａ］前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクが、外因性遺伝子が導入されたT細胞を含む、［１３］～［１５］のいずれか１つに記載のT細胞製品の製造方法。
［１６］さらに、前記T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクから準備したT細胞に外因性遺伝子を含む核酸を導入する工程を含む、［１３］～［１５ａ］のいずれか１つに記載のT細胞製品の製造方法。
［１７］前記外因性遺伝子がCAR遺伝子又は外因性のTCR遺伝子である、［１６］に記載のT細胞製品の製造方法。
［１８］さらに、T細胞を拡大培養する工程を含む、［１３］～［１７］のいずれか１つに記載のT細胞製品の製造方法。
［１９］前記T細胞を拡大培養する工程において、CD30アゴニストによって該細胞を刺激する工程を含む、［１８］に記載のT細胞製品の製造方法。
［１９ａ］前記T細胞を拡大培養する工程において、CD30アゴニストの存在下で該細胞を培養する工程を含む、［１８］に記載のT細胞製品の製造方法。
［２０］T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンク。
［２１］人工多能性幹細胞由来のT細胞を含む、［２０］に記載のT細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンク。
［２２］少なくとも1種類のHLA遺伝子の発現が抑制されたT細胞を含む、［２０］または［２１］に記載のT細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンク。
［２２ａ］外因性遺伝子が導入されたT細胞を含む、［２０］～［２２］のいずれか１つに記載のT細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンク。
［２３］［２０］～［２２ａ］のいずれか１つに記載された2以上の種類のT細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを含む、T細胞マスターセルバンクコレクションおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクコレクション。
［２４］以下の工程を含む、T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを構築する方法。
（I）キメラ抗原受容体（CAR）遺伝子を有さない人工多能性幹細胞を、CAR-T療法用のT細胞に分化させる工程、
（II）該分化させたT細胞をストックする工程、及び
（III）該分化させたT細胞の特性解析を行う工程
［２５］以下の工程を含む、T細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンクを構築する方法。
（ｉ）外因性のT細胞受容体（TCR）遺伝子を有さない人工多能性幹細胞を、TCR-T療法用のT細胞に分化させる工程、
（ｉｉ）該分化させたT細胞をストックする工程、及び
（ｉｉｉ）該分化させたT細胞の特性解析を行う工程
［２５ａ］前記人工多能性幹細胞が外因性遺伝子を有する、［２４］または［２５］に記載の方法。
［２６］前記人工多能性幹細胞が外因性のT細胞受容体（TCR）遺伝子を有する、［２４］または［２５ａ］に記載の方法。
［２７］前記人工多能性幹細胞が少なくとも1種類のHLA遺伝子を欠失している、［２４］～［２６］のいずれか１つに記載の方法。
［２７ａ］前記人工多能性幹細胞が少なくとも1種類のHLA遺伝子の発現が抑制されたものである、［２４］～［２６］のいずれか１つに記載の方法。
［２８］前記T細胞がCD8αβを発現する、［２４］～［２７ａ］のいずれか１つに記載の方法。
［２９］［２４］～［２８ａ］のいずれか１つに記載の方法により構築されたT細胞マスターセルバンクおよび／またはT細胞ワーキングセルバンク。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、人的、時間的および金銭的コストを低減でき、かつロット間差が小さく高品質なoff-the-shelfの同種異系のT細胞製品の提供システムおよび提供方法が提供される。かかるシステムおよび提供方法は、複数種類のT細胞製品を提供する場合に特に優れている。また、前記システムまたは方法の提供に用いることができる、T細胞のマスターセルバンクおよびT細胞ワーキングセルバンク、ならびにこれらのコレクションも提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

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