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公開番号2025124718
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-26
出願番号2025084749,2022206731
出願日2025-05-21,2022-12-23
発明の名称部位特異的抗体コンジュゲーション及びその使用
出願人エフ. ホフマン-ラロシュアーゲー,F. HOFFMANN-LA ROCHE AKTIENGESELLSCHAFT
代理人弁理士法人津国
主分類C07K 16/00 20060101AFI20250819BHJP(有機化学)
要約【課題】医薬組成物として有用な修飾抗体を提供する。
【解決手段】少なくとも抗体重鎖を含む修飾抗体であって、前記抗体重鎖が、前記抗体重鎖の位置118(HC118)、位置177(HC177)、位置297(HC297)、位置341(HC341)及び位置401(HC401)を含む位置の群から互いに独立して選択される1つ以上の位置に、又はそれらの後に挿入される(ナンバリングはKabatに従う)、クツネリア・アルビダ(Kutzneria albida)由来のトランスグルタミナーゼ(KalbTG)に対する1つ又は2つ又は3つ又は4つ以上の第1の認識部位(複数可)を含む、修飾抗体が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
少なくとも抗体重鎖を含む修飾抗体であって、前記抗体重鎖が、前記抗体重鎖の位置１１８（ＨＣ１１８）、位置１７７（ＨＣ１７７）、位置２９７（ＨＣ２９７）、位置３４１（ＨＣ３４１）及び位置４０１（ＨＣ４０１）を含む位置の群から互いに独立して選択される１つ以上の位置に、又はそれらの後に挿入される（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、クツネリア・アルビダ（Ｋｕｔｚｎｅｒｉａａｌｂｉｄａ）由来のトランスグルタミナーゼ（ＫａｌｂＴＧ）に対する１つ又は２つ又は３つ又は４つ以上の第１の認識部位（複数可）を含む、修飾抗体。
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
少なくとも抗体軽鎖を含む修飾抗体であって、前記抗体軽鎖が、前記抗体軽鎖の位置１１０（ＬＣ１１０）、位置１４３（ＬＣ１４３）及び位置２１４（ＬＣ２１４）を含む位置の群から互いに独立して選択される１つ以上の位置に、又はそれらの後に挿入される（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、クツネリア・アルビダ由来のトランスグルタミナーゼ（ＫａｌｂＴＧ）に対する１つ又は２つ又は３つ又は４つ以上の第１の認識部位（複数可）を含む、修飾抗体。
【請求項３】
重鎖及び軽鎖を含む修飾抗体であって、前記重鎖又は／及び前記軽鎖が、前記抗体軽鎖の位置１１０（ＬＣ１１０）、位置１４３（ＬＣ１４３）及び位置２１４（ＬＣ２１４）、並びに前記抗体重鎖の位置１１８（ＨＣ１１８）、位置１７７（ＨＣ１７７）、位置２９７（ＨＣ２９７）、位置３４１（ＨＣ３４１）及び位置４０１（ＨＣ４０１）を含む位置の群から互いに独立して選択される１つ以上の位置に、又はそれらの後に挿入される（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、クツネリア・アルビダ由来のトランスグルタミナーゼ（ＫａｌｂＴＧ）に対する１つ又は２つ又は３つ又は４つ以上の第１の認識部位（複数可）を含む、修飾抗体。
【請求項４】
ＫａｌｂＴＧに対する前記第１の認識部位が、各前記抗体鎖のアミノ酸配列内に存在する、請求項１～３のいずれか一項に記載の修飾抗体。
【請求項５】
前記修飾抗体が、前記抗体重鎖のＣ末端の、又はＣ末端に融合したＫａｌｂＴＧに対する第１の認識部位を更に含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の修飾抗体。
【請求項６】
前記修飾抗体が、前記抗体重鎖の位置４４６（ＨＣ４４６）又は位置４４７（ＨＣ４４７）にＫａｌｂＴＧに対する第１の認識部位を更に含む（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、請求項１～５のいずれか一項に記載の修飾抗体。
【請求項７】
前記修飾抗体が２つの同一の抗体重鎖を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の修飾抗体。
【請求項８】
前記修飾抗体が２つの異なる抗体重鎖を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の修飾抗体。
【請求項９】
前記修飾抗体が、ＫａｌｂＴＧに対する前記認識部位（複数可）に加えて、以下の変異（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）：
ａ）両Ｆｃ領域ポリペプチド中のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；
ｂ）両Ｆｃ領域ポリペプチド中のＰ３２９Ｇ；
ｃ）一方のＦｃ領域ポリペプチド中のＴ３６６Ｗ、及び他方のＦｃ領域ポリペプチド中のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ；
ｄ）一方のＦｃ領域ポリペプチド中のＳ３５４Ｃ、及び他方のＦｃ領域ポリペプチド中のＹ３４９Ｃ；
ｅ）ａ）及びｂ）；
ｆ）ａ）及びｂ）及びｃ）；又は
ｇ）ａ）及びｂ）及びｃ）及びｄ）
を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の修飾抗体。
【請求項１０】
少なくとも１つの修飾抗体重鎖Ｆｃ領域ポリペプチドを含む修飾抗体Ｆｃ領域であって、前記修飾抗体重鎖Ｆｃ領域ポリペプチドが、前記抗体重鎖の位置１１８（ＨＣ１１８）、位置１７７（ＨＣ１７７）、位置２９７（ＨＣ２９７）、位置３４１（ＨＣ３４１）及び位置４０１（ＨＣ４０１）を含む位置の群から互いに独立して選択される１つ以上の位置に、又はそれらの後に（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、クツネリア・アルビダ由来のトランスグルタミナーゼ（ＫａｌｂＴＧ）に対する１つ又は２つ又は３つ又は４つ以上の第１の認識部位（複数可）を含む、修飾抗体Ｆｃ領域。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体技術の分野、特に抗体－薬物コンジュゲートの分野にある。特に、本発明は、クツネリア・アルビダ（Ｋｕｔｚｎｅｒｉａａｌｂｉｄａ）由来のトランスグルタミナーゼのための１つ以上の人工認識部位を含む修飾抗体、及び前記修飾抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートに関する。
続きを表示（約 2,100 文字）【背景技術】
【０００２】
医薬は、疾患を処置、治癒又は予防するために使用される化学物質である。医薬はいくつかの経路を介して投与することができ、多くの医薬品は１つを超える経路によって投与することができる。典型的な投与経路としては、限定されないが、溶液、懸濁液又はエマルジョン（例えば、筋肉内、静脈内、腹腔内、眼内、骨内、皮下又は髄腔内）の経口、直腸、舌下又は局所の注射が挙げられる。明らかに、医薬は通常、患者の体内に全身的に分布しており、望ましくない領域でのその活性のために有害作用を有する可能性がある。他の領域に到達することは困難な場合がある。標的治療は、作用することが意図されている体内の領域に向けられた医薬を使用することによってこの欠点を克服することを目的とする。標的化治療は、従来の非標的化形態の処置よりも効果的であり、副作用が少ないと予想される。
【０００３】
治療実体を意図された作用場所に向ける１つの方法は、標的細胞又は組織において特異的に結合する抗体にそれを結合させることによるものである。抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＡＯＣ）等の抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関連する課題の１つは、それらの製造である。ほとんどの薬物－抗体連結は、チオール－マレイミド化学を可能にする部分的に還元された鎖間ジスルフィド結合、又は活性化エステルを使用したリジン官能化若しくは人工的に導入されたシステイン残基のいずれかを利用する。この方法は、異なる部位に結合した異なる数の薬物を有するコンジュゲート抗体種の統計的混合物をもたらす。モノメチルアウリスタチンＥペイロードを有するＡＤＣでは、４、６、又は８の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有するＡＤＣ種は、次第に疎水性となることが実証され、ＤＡＲ２種よりもはるかに凝集しやすいことが示された（Ａｄｅｍｅｔａｌ．）。
【０００４】
したがって、治療実体の結合の数及び部位をより正確に制御して、標的化治療のためのＡＤＣ、例えばＡＯＣを提供することが望ましい。それにより、ＡＤＣの均一性が高められるはずである。改善された部位特異的コンジュゲーション技術は、治療用ＡＤＣ並びに診断用抗体標識又は抗体－酵素コンジュゲートの調製における潜在的な使用のために、多くの製薬会社の関心の対象であり続けている。
【０００５】
ストレプトミセス・モバラエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ）由来の微生物トランスグルタミナーゼは、タンパク質架橋並びに部位特異的タンパク質標識のための安価で使いやすい酵素として浮上している（Ａｎｄｏｅｔａｌ．，２０１４；Ｓｔｒｏｐｅｔａｌ．，２０１３）。
【０００６】
クツネリア・アルビダ（Ｋｕｔｚｎｅｒｉａａｌｂｉｄａ）からの新規トランスグルタミナーゼ（ＫａｌｂＴＧ）の発見及びそれぞれのペプチド基質の同定は、Ｓｔｅｆｆｅｎｅｔａｌ．（２０１７）によって記載されている。ＫａｌｂＴＧは、以前に記載された微生物トランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）と比較して、同様の効率を示すが、特異性及び発達性が改善されている。
【０００７】
米国特許出願公開第２０２０／０２４９２３１号は、トランスグルタミナーゼ種の同定及び特徴付けのためのシステム及び方法を報告した。
【０００８】
ＩｇＧ重鎖Ｃ末端は、抗体標識のためのｍＴＧのための適切なＱタグ挿入部位として記載されている（例えば、国際公開第２０２１／１７４０９１号を参照）。
【発明の概要】
【０００９】
上記の欠点を回避するため、本発明の目的は、ＫａｌｂＴＧ媒介コンジュゲーションに関して修飾抗体の改善された特性をもたらすＱタグモチーフの組み込みのためのＩｇＧ分子内の部位を同定することであった。Ｑタグの組み込みは、抗体の折り畳み又は機能を損なわず、又は発現収率を低下させず、コンジュゲーションに必要なアクセス可能性並びに治療実体の治療活性を提供すべきである。本発明によるそのような部位の成功した同定は、定義された化学量論及び制御された部位特異的様式でのＩｇＧ分子あたり１つ以上の治療部分の組み込みを可能にする。それにより、より均一なコンジュゲート生成物を提供することができ、例えば、必要な精製及び分離努力を軽減し、より好ましい薬物様特性を有する分子を得ることができる。さらに、コンジュゲーションプロセス及び／又はコンジュゲートペイロードによる抗体のその抗原への結合を損なうリスクが低減される。
【００１０】
本発明者らは、とりわけ、ペイロードをＩｇＧ重鎖Ｃ末端に結合させると、凝集及び疎水性が増加することを観察した。ＫａｌｂＴＧを使用して医薬として有用な抗体－薬物コンジュゲートを調製できるようにするために、ＫａｌｂＴＧＱ－タグは、本発明によるＩｇＧ骨格内の規定された部位に導入されなければならない。
（【００１１】以降は省略されています）

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