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公開番号2025121978
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-20
出願番号2025077324,2021545613
出願日2025-05-07,2020-09-11
発明の名称DcR3改変体
出願人協和キリン株式会社
代理人弁理士法人津国
主分類C07K 14/715 20060101AFI20250813BHJP(有機化学)
要約【課題】Decoy Receptor 3(DcR3)のリガンドに対する結合活性(好ましくは中和活性)を有するとともに、哺乳動物由来の細胞を宿主として作製する時に野生型DcR3と比較して凝集体の生成量が低下する、及び/又は、改善した体内動態を示すDcR3改変体、該DcR3改変体をコードするDNA、該DNAを含むベクター、該ベクターを導入して得られる形質転換体、該形質転換体を用いる改変体の製造方法、並びに、該改変体を有効成分とする自己免疫疾患、炎症性疾患又はアレルギー性疾患の予防又は治療剤を提供する。
【解決手段】野生型DcR3の改変体であるDcR3改変体であって、前記野生型DcR3よりも改善した体内動態を示す、前記DcR3改変体。該DcR3改変体は、DcR3の一部とTNFスーパーファミリー分子の一部とを含むDcR3改変体であってよい。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
野生型ＤｅｃｏｙＲｅｃｅｐｔｏｒ３（以下、ＤｃＲ３と略記する）の改変体であるＤｃＲ３改変体であって、前記野生型ＤｃＲ３よりも改善した体内動態を示す、前記ＤｃＲ３改変体。
続きを表示（約 830 文字）【請求項２】
１以上のＮ－グリコシド結合複合型糖鎖を有する、請求項１に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項３】
ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ及びＦａｓＬのうちの少なくとも一つ以上に対して中和活性を有する、請求項１に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項４】
ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ及びＦａｓＬの全てに対して中和活性を有する、請求項１に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項５】
ＦａｓＬに対して中和活性を有さず、且つ、ＬＩＧＨＴ及びＴＬ１Ａのいずれか一つ以上に対して中和活性を有する、請求項１に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項６】
ＦａｓＬに対して中和活性を有さず、且つ、ＬＩＧＨＴ及びＴＬ１Ａに対して中和活性を有する、請求項１に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項７】
野生型ＤｃＲ３のシステインリッチ領域において、野生型ＤｃＲ３のシステインリッチドメイン（以下、ＣＲＤと略記する）の少なくとも一部が、ＤｃＲ３以外のＴＮＦ受容体スーパーファミリー分子のシステインリッチドメインの少なくとも一部で置換されたアミノ酸配列からなる第１のキメラ型システインリッチ領域、あるいは、前記第１のキメラ型システインリッチ領域のアミノ酸配列において、１～３０個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列からなる第２のキメラ型システインリッチ領域を含む、ＤｃＲ３改変体。
【請求項８】
１以上のＮ－グリコシド結合複合型糖鎖を有する、請求項７に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項９】
ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ及びＦａｓＬのうちの少なくとも一つ以上に対して中和活性を有する、請求項７に記載のＤｃＲ３改変体。
【請求項１０】
ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ及びＦａｓＬの全てに対して中和活性を有する、請求項７に記載のＤｃＲ３改変体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、野生型ＤｃＲ３の改変体であるＤｃＲ３改変体に関する。より詳しくは、本発明は、ＤｃＲ３のリガンドに対する結合活性（好ましくは中和活性）を有するとともに、哺乳動物由来の細胞を宿主として作製する時に野生型ＤｃＲ３と比較して凝集体の生成量が低下する、及び／又は、改善した体内動態を示すＤｃＲ３改変体に関する。
続きを表示（約 2,000 文字）【背景技術】
【０００２】
Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）及びＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）はそれぞれ、構造的に類似した１８個のリガンド及び２９個の受容体ファミリーを形成している。このファミリーに含まれる多くの分子に対する抗体及びＦｃ融合タンパク質が開発及び上市され、種々の自己免疫疾患の治療において治療効果を示している（非特許文献１）。
【０００３】
ＴＮＦＲＳＦの多くは細胞膜上に発現し、リガンド結合により下流にシグナルを伝達するが、いくつかの分子はシグナル伝達に関与しない、おとり（デコイ）受容体（ＤｃＲ）である。デコイ受容体は、これまでにＤｃＲ１、ＤｃＲ２、ＤｃＲ３及びＯＰＧ（Ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）の４つが同定されている。
【０００４】
ＯＰＧはＲＡＮＫＬ及びＴＲＡＩＬに対する可溶型デコイ受容体であり、ＲＡＮＫＬ受容体及びＴＲＡＩＬ受容体のリガンドとの結合に競合することでシグナル伝達を阻害する。一方、ＤｃＲ１及びＤｃＲ２はＴＲＡＩＬに対して、並びに、ＤｃＲ３はＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ、及びＦａｓＬの３分子に対して、いずれもシグナルを伝達する受容体との結合を競合的に阻害することでリガンドを中和するデコイ受容体である（非特許文献２）。
【０００５】
ＤｃＲ３は３００アミノ酸残基からなる可溶型分子である。Ｎ末端側にはシグナルペプチド、次いでＴＮＦＲＳＦに特徴的なシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を４つ有し（ＣＲＤ１、ＣＲＤ２、ＣＲＤ３及びＣＲＤ４）、Ｃ末端側にはヘパラン硫酸結合モチーフを含む塩基性アミノ酸に富んだヘパラン硫酸結合領域（ＨＢＤ）を有する。ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ及びＦａｓＬはいずれもＤｃＲ３のＣＲＤ２及びＣＲＤ３を介して結合する（非特許文献３、４、５）。
【０００６】
ＤｃＲ３は、リガンド中和によるデコイ受容体としての機能以外にも、ＨＢＤの活性に基づく免疫調節分子としての機能がある。例えば、単球、マクロファージ、又は樹状細胞の細胞膜上のヘパラン硫酸をはじめとするグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に対してＨＢＤを介して直接結合し、樹状細胞の分化によるＴｈ２誘導、Ｍ２マクロファージの誘導、単球の接着亢進、破骨細胞分化、又はＭＨＣクラスＩＩ分子の発現低下等、様々な免疫抑制及び免疫賦活作用を惹起することが報告されている。（非特許文献６、１２）。
【０００７】
ＤｃＲ３リガンドは自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、がん、感染症、又はその他各種炎症反応における関与が報告されている。例えば、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ及びＦａｓＬはいずれも炎症性腸疾患（ＩＢＤ）において感受性遺伝子座に含まれており、特に、ＴＬ１Ａについては病態に関連する複数の遺伝子多型の存在が分かっている。また、ＩＢＤ患者の血中又は組織におけるＤｃＲ３リガンドの発現亢進、及び、マウス腸炎モデルにおけるＤｃＲ３リガンド阻害による病態改善の報告もある（非特許文献６～９）。
【０００８】
ヒトの正常組織におけるＤｃＲ３の発現は極めて低レベルであるが、感染又は組織障害によりその発現が誘導される。更に、ＩＢＤ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、又は関節リウマチ（ＲＡ）等の種々の自己免疫疾患又は炎症性疾患において、ＤｃＲ３の血中レベルが上昇していることが分かっている。また、マウスではＤｃＲ３ホモログが同定されていないが、Ｉ型糖尿病モデル、多発性硬化症モデル、又は腎炎モデル等のマウス病態モデルにおいては、ヒトＤｃＲ３のトランスジェニックマウスにおける病態の改善、及び、プラスミド又は組換えＤｃＲ３投与による薬効が、それぞれ確認されている（非特許文献６、１０）。
【０００９】
Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社は、ヒトＤｃＲ３遺伝子をクローニングし、ＤｃＲ３及びヒトＩｇＧ１のＦｃ領域との融合体が、可溶型ヒトＦａｓＬに結合すること、ｉｎｖｉｔｒｏにおいてヒトＦａｓＬ依存的なアポトーシスを阻害することを示した（特許文献１）。
【００１０】
ＥｌｉＬｉｌｌｙ社は、野生型ＤｃＲ３の１アミノ酸変異（Ｒ２１８Ｑ）により、プロテアーゼ耐性のＤｃＲ３変異体であるＦＬＩＮＴを取得し、マウス及びサルにおいて野生型ＤｃＲ３よりも体内動態が改善することを報告している。しかしながら、カニクイザルに野生型ＤｃＲ３及びＦＬＩＮＴを０．５ｍｇ／ｋｇ静脈内注射で投与した際の血中半減期は、それぞれ、９時間及び１２．３時間と極めて短い（特許文献２、３、非特許文献１１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
（【００１１】以降は省略されています）

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