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公開番号2025124629
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-26
出願番号2025069310,2022514843
出願日2025-04-21,2020-09-04
発明の名称治療用融合タンパク質
出願人ノバルティスアーゲー
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 19/00 20060101AFI20250819BHJP(有機化学)
要約【課題】急性炎症性臓器損傷(AOI)の処置又は予防における使用のための融合タンパク質を提供する。
【解決手段】本発明は、薬剤又は研究ツールとしての使用に適した融合タンパク質に関する。融合タンパク質の治療的使用は、急性又は慢性の炎症性及び免疫系に起因する臓器及び微小血管障害、例えば、急性腎障害、急性呼吸窮迫症候群、敗血症、急性心筋梗塞、組織線維症、及び組織外傷に起因する他の臓器損傷の予防又は処置を含み得る。インテグリン結合ドメイン、ホスファチジルセリン(PS)結合ドメイン、及び可溶化ドメインを含むエフェロサイトーシスを強化するための治療用融合タンパク質であって、前記可溶化ドメインが前記インテグリン結合ドメインと前記PS結合ドメインとの間に挿入され、前記インテグリン結合ドメインがインテグリンに結合する、前記治療用融合タンパク質が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
インテグリン結合ドメイン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）結合ドメイン、及び可溶化
ドメインを含むエフェロサイトーシスを強化するための治療用融合タンパク質であって、
前記可溶化ドメインが前記インテグリン結合ドメインと前記ＰＳ結合ドメインとの間に挿
入され、前記インテグリン結合ドメインがインテグリンに結合する、前記治療用融合タン
パク質。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
前記インテグリン結合ドメインが、αｖβ３及び／又はαｖβ５及び／又はα８β１イ
ンテグリンに結合する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
前記インテグリン結合ドメインが、アルギニン－グリシン－アスパラギン酸（ＲＧＤ）
モチーフを含む、請求項１又は２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記可溶化ドメインが、前記インテグリン結合ドメイン、前記ＰＳ結合ドメイン、又は
両方のドメインに直接連結している、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合タンパク
質。
【請求項５】
前記可溶化ドメインが、リンカーによって前記インテグリン結合ドメイン及び／又は前
記ＰＳ結合ドメインに間接的に連結している、請求項１～４のいずれか一項に記載の融合
タンパク質。
【請求項６】
前記可溶化ドメインが、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡのドメイン３（ＨＳＡ
Ｄ３）、Ｆｃ－ＩｇＧ、又はそれらの機能的変異体を含む、請求項１～５のいずれか一
項に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
前記インテグリン結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を、若しくはそれに対し
て少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記ＰＳ結合ドメインが、配列番号３のアミノ
酸配列を、若しくはそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、又は前記Ｐ
Ｓ結合ドメインが、配列番号７６のアミノ酸配列を、若しくはそれに対して少なくとも９
０％の配列同一性を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
前記インテグリン結合ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を、又はそれに対して少
なくとも９０％の配列同一性を有し、前記ＰＳ結合ドメインが、配列番号７８のアミノ酸
配列を、又はそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～７のいず
れか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
前記インテグリン結合ドメインが、配列番号７７のアミノ酸配列を、若しくはそれに対
して少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記ＰＳ結合ドメインが、配列番号３のアミ
ノ酸配列を、若しくはそれに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、又は前記
ＰＳ結合ドメインが、配列番号７６のアミノ酸配列を、若しくはそれに対して少なくとも
９０％の配列同一性を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
前記可溶化ドメインがＨＳＡであり、配列番号４のアミノ酸配列を、又はそれに対して
少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の融合タン
パク質。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、全体が
参照により本明細書に援用される。２０２０年８月３１日に作成された前記ＡＳＣＩＩの
コピーは、ＰＡＴ０５８３３２＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは６５３，１９３バ
イトである。
続きを表示（約 6,200 文字）【０００２】
本発明は、インテグリン結合及びホスファチジルセリン結合能力の両方を含む融合タン
パク質に関する。融合タンパク質は、特に急性又は慢性の炎症性障害、並びに免疫系又は
凝固によって引き起こされる器官及び微小血管障害の予防又は処置のための治療薬として
使用することができる。
【背景技術】
【０００３】
急性炎症性臓器損傷（ＡＯＩ）は、高い罹患率、死亡率、及び重大な満たされていない
医療ニーズを伴う歴史的に困難な疾患である。典型的なＡＯＩには、世界中で毎年３，２
４０万人の患者に発生する心筋梗塞（ＭＩ）及び脳卒中が含まれる。過去にＭＩ及び脳卒
中を患った患者は、世界保健機関（ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏ
ｎ）によって、先進国の罹患率の上位の原因の１つにランクされている、さらなる冠動脈
及び脳のイベントのリスクが最も高い群と見なされている。別のＡＯＩは急性腎障害（Ａ
ＫＩ）であり、これは年間約１，３３０万人に発生する。高所得国では、ＡＫＩの発生率
は３～５／１０００であり、高い死亡率（１４～４６％）と関連している（Ｍｅｔｈａ
ｅｔａｌ．，（２０１５）Ｌａｎｃｅｔ，３８５（９９８７）：２６１６－４３）。Ｍ
Ｉ及び脳卒中と同様に、ＡＫＩの生存者は完全に回復しないことが多く、慢性腎疾患又は
末期腎疾患を発症するリスクが高い。現在まで、ＡＫＩを予防又は処置するために利用で
きるＦＤＡ承認薬は存在しない。ＡＫＩの新規処置の開発は困難であることが証明されて
おり、これまでのところ臨床試験で成功した結果はない。これは、敗血症、虚血／再灌流
及び／又は腎毒性損傷によって誘発される炎症性、微小血管機能障害、及び腎毒性の病理
学的機序を含む、ＡＫＩの多因子的且つ多面的な病態生理学に起因する可能性がある。こ
れらのドライバーは、同時に又は連続して作用して、大半が尿細管細胞であるが糸球体細
胞の損傷、腎機能予備能の喪失、そして最終的には腎不全を引き起こす可能性がある。
【０００４】
ＡＯＩの一般的な共通因子の１つは、組織損傷による細胞死の増加、細胞断片の生成の
増加、並びに循環及び損傷組織に侵入し得る血栓形成促進／炎症誘発性微粒子である。感
染を防ぐために好中球が組織に浸潤した後、好中球は、影響を受けた組織でアポトーシス
又は他の形態の細胞死を起こす。好中球には、タンパク質分解酵素及び危険関連分子パタ
ーン（ＤＡＭＰ）などの有害物質が含まれており、宿主組織の損傷を促進し、炎症を伝播
させる可能性がある。死滅細胞の効率的な取り込みは、非炎症性の分解促進表現型に向け
たマクロファージ（ＭΦ）の再プログラミング、並びに影響を受けた組織の分解及び修復
の成功のための主要なメディエーターの放出につながる、シグナル伝達イベントを引き起
こす。この再プログラミングは、最近、マクロファージにおける食作用性抗炎症反応を活
性化する代謝シグナル伝達に起因するとされている（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，（２０
１９）ＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２９（２）：４４３－５６）。非炎症性の方法
でのこの破片、又は老化若しくは死滅細胞の除去は、「エフェロサイトーシス」と呼ばれ
る。
【０００５】
しかし、エフェロサイトーシスが遅延した場合、壊死細胞が蓄積し、例えば、マクロフ
ァージによる炎症誘発性サイトカイン（ＴＮＦ－α）又は免疫抑制性ＩＬ－１０をトリガ
ーする炎症反応を引き起こし得る（Ｇｒｅｅｎｌｅｅ‐Ｗａｃｋｅｒ（２０１６）Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ，２７３：３５７－３７０）。さらに、細胞の破片及び粒子が
効率的に除去されない場合、好中球－血小板断片クラスター、微小血栓などの細胞塊及び
凝集体を引き起こし、且つ／又はＡＴＰ、ＤＮＡ、ヒストン又はＨＭＧＢ１などの危険関
連分子パターン（ＤＡＭＰＳ）を放出する可能性がある。結果には、微小血管閉塞、機能
不全、並びに組織損傷の進行、一次及び二次臓器不全、又は修復不適応をもたらす顕著な
無菌性炎症が含まれ得る。
【０００６】
ＡＯＩの急性期では、エフェロサイトーシス経路が大幅にダウンレギュレーションされ
ているように見える。損傷に対する炎症又は急性反応（器質的要因、低酸素症、酸化スト
レス、照射、炎症、及び感染）は、架橋タンパク質及び細胞表面エフェロサイトーシス／
クリアランス受容体を含む専用のホスファチジルセリン（ＰＳ）結合タンパク質のダウン
レギュレーションによって効果的なエフェロサイトーシス又は食作用を抑制する。エフェ
ロサイトーシス受容体の機能不全の例は、Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）などの
ＴＡＭファミリー受容体のタンパク質分解性シェディングである。ＭｅｒＴＫは、食細胞
で優先的に発現する内在性膜タンパク質であり、シグナル伝達タンパク質として機能する
だけでなく、エフェロサイトーシス（Ｇａｓ６又はプロテインＳなどのタンパク質を介し
て）を促進し、炎症性シグナル伝達を阻害する。ＭｅｒＴＫの可溶性エクトドメインのタ
ンパク質分解切断及び放出は、メタロプロテイナーゼＡＤＡＭ１７によって誘導される。
シェディングプロセスは、表面ＭｅｒＴＫの剥脱により、食細胞のエフェロサイトーシス
を減少させることができる。さらに、放出されたエクトドメインは、インビトロでエフェ
ロサイトーシスを阻害することもできる（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，（２０１５）Ｊ
ＭｏｌＣｅｌｌＣａｒｄｉｏｌ．，８７：１７１－９；Ｍｉｌｌｅｒｅｔａｌ．
，（２０１７）ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，２３（３）：６２３－６２９）。血
清／血漿可溶性Ｍｅｒ量の増加は、典型的には、糖尿病性腎症又は全身性エリテマトーデ
ス（ＳＬＥ）などの炎症性、悪性、又は自己免疫性疾患で観察され、疾患の重症度を示し
得る（ＯｃｈｏｄｎｉｃｋｙＰ（２０１７）ＡｍＪＰａｔｈｏｌ．，１８７（９）
：１９７１－１９８３；Ｗｕｅｔａｌ．，（２０１１）ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓ
Ｔｈｅｒ．１３：Ｒ８８）。さらに、乳脂肪球－ＥＧＦ第８因子タンパク質（ＭＦＧ－
Ｅ８）などの架橋タンパク質も、大半の急性及び慢性の炎症性疾患の間にダウンレギュレ
ーションされる。可溶性Ｍｅｒと同様に、ＭＦＧ－Ｅ８の血清／血漿濃度の低下は、ＭＩ
を有する患者又は安定狭心症患者に見ることができ（Ｄａｉｅｔａｌ．，（２０１６
）ＷｏｒｌｄＪＣａｒｄｉｏｌ．，８（１）：１－２３）、慢性閉塞性肺疾患につい
て説明されているように、疾患の重症度を示し得る（ＣＯＰＤ；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ
．，（２０１５）上掲）。
【０００７】
死滅細胞へのホスファチジルセリン（ＰＳ）曝露は、免疫細胞に対する進化的に保存さ
れた抗炎症及び免疫抑制シグナルである。膨大な数の主要な哺乳動物病原体が、病原性細
胞感染の一部としてＰＳ媒介性取り込みを利用している（Ｂｉｒｇｅｅｔａｌ．，（
２０１６）ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆ．，２３（６）：９６２－７８）。例えば、
ウイルスは、ＰＳ結合受容体に直接、又はＧａｓ６などのタンパク質を介して結合できる
（Ｍｏｒｉｚｏｎｏ＆Ｃｈｅｎ（２０１４）ＪＶｉｒｏｌ．，８８（８）：４２７５－
９０）。傷害に応答した内因性クリアランス経路の不活性化は、傷害後に細胞に侵入し細
胞を乗っ取る感染性病原体の効率を低下させ、それによって宿主の免疫応答及び防御を回
避する進化的に発達した応答を提示する可能性がある。結果として、クリアランス経路の
ダウンモジュレーションは、感染と戦うための自然免疫及び獲得免疫エフェクターの有効
性を改善するであろう。「フレンドリーファイア」の結果として、急性臓器損傷時にエフ
ェロサイトーシスが一過性に影響を受ける可能性があり、ＡＯＩで上記の合併症が発生し
得る。死滅細胞、破片、炎症誘発性及び血栓形成促進性のＭＰの蓄積は、ＡＯＩの特徴で
あり、炎症及び微小血管損傷の主要なトリガーを表す。炎症性及び血栓形成促進性微粒子
のそのような蓄積は、高い医学的必要性を伴う重篤な疾患において一般的であり、それら
の罹患率に寄与し得ることは注目に値する。そのような適応症の例は、敗血症及び癌であ
る（Ｙａｎｇｅｔａｌ．，（２０１６）ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ．，３７（６）：７
８８１－９１；Ｚｈａｏｅｔａｌ．，（２０１６）ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃ
ｅｒＲｅｓ．，３５：５４；Ｍｕｈｓｉｎ－Ｓｈａｒａｆａｌｄｉｎｅｅｔａｌ．
，（２０１７）ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａＧｅｎＳｕｂｊ．，１８
６１（２）：２８６－２９５；Ｍａｅｔａｌ．，（２０１７）ＳｃｉＲｅｐ．，７
（１）：４９７８；Ｓｏｕｚａｅｔａｌ．，（２０１５）ＫｉｄｎｅｙＩｎｔ．８
７（６）：１１００－８）。この分野におけるこれまでの創薬の取り組みは、ＰＳ結合タ
ンパク質に焦点を当てており、これは、（Ｌｉｅｔａｌ．，（２０１３）ＥｘｐＯ
ｐｉｎＴｈｅｒＴａｒｇｅｔｓ，１７（１１）：１２７５－１２８５）によってレビ
ューされるように、薬剤候補設計の基礎として役立ち得る。
【０００８】
ＰＳ結合タンパク質のサブセットは、食細胞を含む多くの細胞型で発現する、αｖβ３
及びαｖβ５などのインテグリンも認識し結合する。これらのタンパク質は、アポトーシ
ス／死滅細胞をインテグリンに曝露してＰＳを架橋するように作用し、マクロファージ及
びノンプロフェッショナル食細胞によるエフェロサイトーシス（食作用とも呼ばれる）を
もたらす。いくつかの架橋タンパク質はまた、大半の急性及び慢性の炎症性疾患の間にダ
ウンレギュレーションされる。そのような架橋タンパク質又はその切断型バージョンの治
療的使用は以前に示唆されている（国際公開第２００６１２２３２７号パンフレット（敗
血症）、国際公開第２００９０６４４４８号パンフレット（虚血／再灌流後の臓器損傷）
、国際公開第２０１２１４９２５４号パンフレット（脳虚血）ＴｈｅＦｅｉｎｓｔｅｉ
ｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ；国際公開第２０
１５０２５９５９号パンフレット（心筋梗塞）九州大学及び東京医科大学；国際公開第２
０１５０１７５５１２号パンフレット（骨吸収）ペンシルベニア大学；国際公開第２０１
７０１８６９８号パンフレット（組織線維症）ＫｏｒｅａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＲｅ
ｓｅａｒｃｈａｎｄＢｕｓｉｎｅｓｓＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ及び米国特許出願公開
第２０１８０３３４４８６号明細書（組織線維症）ＮｅｘｅｌＣｏ．，Ｌｔｄ．）；し
かし、野生型又は天然に存在するタンパク質の使用は、多くの問題によって制限されてい
る。例えば、野生型ＭＦＧ－Ｅ８（ｗｔＭＦＧ－Ｅ８）は、細胞発現系で培養した場合、
発達性が低く、溶解性が低く、非常に低い収量で発現すると考えられている。Ｃａｓｔｅ
ｌｌａｎｏｓｅｔａｌ．，（２０１６）の研究によると、昆虫又はＣＨＯ細胞でＦｃ
－ＩｇＧ融合体として発現するＭＦＧ－Ｅ８は完全に凝集しており、ＴｒｉｔｏｎＸ－
１００又はＣＨＡＰＳなどの界面活性剤を添加することによってのみ効率的に精製できる
ことが示されている（Ｃａｓｔｅｌｌａｎｏｓｅｔａｌ．，（２０１６）Ｐｒｏｔｅ
ｉｎＥｘｐ．Ｐｕｒ．，１２４：１０－２２）。
【０００９】
架橋タンパク質、例えば、ＭＦＧ－Ｅ８、ＥＤＩＬ３、Ｇａｓ６による、死滅細胞、破
片、微粒子の除去は、無菌炎症及び微小血管機能障害の主な原因を排除し、したがって組
織損傷の進行を防ぎ、炎症の解消を可能にし得る。したがって、ＡＯＩの過程で死滅細胞
のクリアランスを促進する治療アプローチは、ＡＯＩの病状を軽減又は少なくとも緩和す
るために使用される可能性があり、死滅細胞又はＰＳ曝露微粒子が十分にクリアされない
他の疾患設定で意味がある可能性がある。そのため、組織損傷及び炎症を軽減するために
使用でき、ＡＯＩの満たされていない医療ニーズに対処するための望ましい製造特性を有
する、治療剤が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本開示において、出願人らは、野生型架橋タンパク質の前述の望ましくない特性及び産
生の問題を伴わずに、天然に存在するタンパク質（例えば、ＭＦＧ－Ｅ８）の構造に基づ
いて組換え治療用融合タンパク質を生成した。本開示の融合タンパク質は、インテグリン
結合ドメイン、ＰＳ結合ドメイン、及び可溶化ドメインを含む。融合タンパク質は、野生
型ＭＦＧ－Ｅ８タンパク質の主要な生物学的機能を、例えば、ＰＳ曝露死滅細胞、破片、
及び微粒子を食細胞に架橋し、したがってエフェロサイトーシスをトリガーするように機
能することによって、維持する。さらに、本開示の治療用融合タンパク質は、野生型ＭＦ
Ｇ－Ｅ８タンパク質（配列番号１）と比較して、開発可能性が改善されており、特に粘着
性が低下し、溶解性が改善されている。さらに、これらの治療用融合タンパク質は、野生
型ＭＦＧ－Ｅ８タンパク質と比較した場合、血漿曝露がより長く、細胞発現系で発現した
場合の収量がより高くなる。
（【００１１】以降は省略されています）

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